[发明专利]抗体的纯化方法、抗体和应用

说明书

本发明提供了一种抗体的纯化方法、抗体和应用，涉及蛋白纯化的技术领域。该纯化方法包括：提供含有抗体粗品的细胞发酵液；提供用于层析的缓冲液；然后使用AKTA Avant 150对抗体粗品进行组合层析；其中组合层析依次包括(a)亲和层析以捕获抗体；(b)凝胶过滤层析置换Buffer以脱盐；(c)再次层析分离抗体以对抗体进行精纯处理。该抗体纯化方法具有操作简单、纯化效率高、样品损失少和纯化出的抗体纯度高的优点。

技术领域

本发明涉及蛋白纯化技术领域，尤其是涉及一种抗体的纯化方法、抗体和应用。

背景技术

1986年首次治疗性单克隆抗体(单抗)获得批准后，人们对治疗性单抗的需求显着增加。截止2015年11月，53种新型治疗性单克隆抗体进入3期临床研究，比2009年增加了104％，其中六个已于2016年在欧盟或美国首次获得批准。目前每年约有4种新的治疗性单抗产品的获得上市批准，按照这样的增加速度，到2020年市场上预计将会有70种单抗，全球销售额将达到1250亿美元。

治疗单克隆抗体的纯化制备，多数是基于Protein A的亲和层析作为第一步进行纯化，但是通常情况下，一步ProteinA亲和层析的纯度等方面达不到治疗抗体的要求(一般纯度要求95％)，另外由于是CHO细胞系作为宿主表达抗体时，细胞培养上清中，不仅含有目标抗体，而且还有宿主蛋白(HCP)，宿主DNA(HCD)等杂质，单纯一步Protein A层析去除不掉全部的杂质，需要额外增一步或者几步层析过程来满足要求。

治疗性单克隆抗体最常见的纯化工艺的层析过程是Protein A(亲和层析，AC)，脱盐(BEX)，阳离子交换(CEX)，脱盐(BEX)，阴离子交换(AEX)。脱盐过程可以使用脱盐柱或者超滤脱盐。目前，几乎大部分纯化工作人员都是采用的手动一步层析方法，每步层析都需要单独的上样，洗脱，处理样品，然后进行下一步层析操作，极少同时用到手动两步层析方法进行纯化。手动层析不仅会造成样品的损失，而且人工耗时多，设备投入量较大。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种抗体的纯化方法，具有操作简单、纯化效率高、样品损失少和纯化出的抗体纯度高的优点。

本发明的第二目的在于提供一种使用上述抗体的纯化方法纯化得到的抗体。

本发明的第三目的在于提供一种上述抗体的纯化方法在制备抗体药物中的应用。

为解决上述技术问题，本发明特采用如下技术方案：

本发明提供了一种抗体的纯化方法，包括：提供含有抗体粗品的细胞发酵液；提供用于层析的缓冲液；然后使用AKTA Avant 150对抗体粗品进行组合层析；所述组合层析依次包括如下步骤:

(a)亲和层析以捕获抗体；

(b)凝胶过滤层析置换Buffer以脱盐；

(c)再次层析分离抗体以对抗体进行精纯处理；

其中，AKTA Avant 150中管路与层析柱的连接方式为：设备的Out1出口连接到Loop环的上样口，将用于步骤(a)的亲和层析柱连在柱位Position 3；将用于步骤(b)的凝胶过滤层析柱替换掉Loop环；将用于步骤(c)的层析柱连接在柱位Position 1。

优选地，用于步骤(a)的亲和层析柱中的填料包括Protein A、Protein G或Protein L中的至少一种；优选为Protein A。

优选地，步骤(c)中再次层析分离抗体的方式包括：离子交换层析、亲和层析、羟基磷灰石层析或疏水相互作用层析。

优选地，步骤(c)中再次层析分离抗体的方式为离子交换层析，优选为阳离子交换层析。