[发明专利]阿司匹林个体化用药基因检测试剂盒及检测方法

说明书

本发明提供了一种检测阿司匹林个体化用药基因检测试剂盒，其特征在于包括以下成分:PTGS1（‑842A>G）、ITGA2（759C>T）、ITGB3（176T>C）和PEAR1（‑9‑3996G>A）位点扩增和测序引物4对、PCR扩增试剂、PCR产物纯化试剂和DNA测序试剂，各引物的核苷酸序列如SEQ NO.5‑12所示，具体见表1。本发明具有如下技术效果：提供了一种针对中国人群阿司匹林个体化用药的基因检测试剂盒，且灵敏度高准确率高。所述的试剂盒用于PTGS1（‑842A>G）、ITGA2（759C>T）、ITGB3（176T>C）和PEAR1（‑9‑3996G>A）基因分型检测，通过该项目检测可以发现个体间的遗传差异，提前判断阿司匹林抵抗的风险情况，从而采取个体化的抗血小板治疗，实现精准治疗和预防心血管事件的发生。

技术领域

本发明属生物技术领域，具体涉及检测阿司匹林个体化用药基因检测试剂盒及检测方法。

背景技术

阿司匹林是解热镇痛非甾体抗炎药，主要通过抑制前列腺素、缓激肽、组胺等的合成，产生解热镇痛和抗炎作用。解热作用机制是通过作用于下丘脑体温调节中枢使外周血管扩张，皮肤血流增加，散热增加从而达到降温作用，其镇痛作用为外周性镇痛药；阿司匹林也是常用的抗血小板聚集药物，它通过抑制血小板的环氧化酶，减少前列腺素的生成，而使血小板凝聚发生抑制作用，临床上广泛用于降低急性心肌梗死疑似患者的发病风险、预防心肌梗死复发、中风的二级预防、降低短暂性脑缺血发作TIA及其继发脑卒中的风险、降低稳定性和不稳定性心绞痛患者的发病风险等。

阿司匹林作为一种有效的抗血小板聚集药物广泛应用于心脑血管疾病的防治，临床观察显示阿司匹林可减少高危患者心肌梗死、心源性猝死，但不是所有患者都能从阿司匹林治疗中获益，有研究显示有些接受阿司匹林治疗的患者仍发生缺血性血管事件。

临床发现部分患者尽管长期低剂量服用阿司匹林仍不能有效抑制血小板的活性，有心血管事件的发生，这种现象被称为阿司匹林抵抗(AR)，其发生率约5％-60％。血小板整联糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(GPIⅡb/Ⅲa)在血管损伤部位血小板聚集和急性血栓形成中起重要作用。研究表明，基因多态性在阿司匹林抵抗中起着重要作用，主要集中在GPIⅡa P1A1/A2、COX和PEAR1基因多态性。

环氧合酶(cyclooxygenase,COX)是合成前列腺素的限速酶。目前已知的有三个COX同功酶：COX-1、COX-2和COX-3。在药理上，抑制COX可以减轻炎症的疼痛症状。阿司匹林的作用机制主要是抑制COX的活性。研究表明，COX-1基因多态性可能通过妨碍阿司匹林对其乙酰化，影响作用效果。有研究发现，汉族人COX-1基因A842G位点的单核苷酸多态性可能与AR的发生有关，AG和GG基因型的患者更容易发生AR。

GP IIIa PlA2是阿司匹林抵抗主要基因，这个基因突变使得GP IIb/IIIa受体结构发生变，使血小板之间发生交叉连接，导致血小板聚集。研究发现携带突变型P1A2等位基因患者行支架术后，其亚急性血栓事件发生率是P1A1纯合野生型患者的5倍，一般需要更高剂量的阿司匹林才能达到抗凝效果。发生阿司匹林抵抗患者携带P1A2等位基因的频率明显高于阿司匹林敏感患者，且P1A2/A2纯合突变型患者服用阿司匹林后疗效均不良。

PEAR1是表达在血小板和内皮细胞上的Ⅰ型膜蛋白。该受体的磷酸化可能促进αⅡbβ3信号的激活放大，使大量血小板脱颗粒，引起血小板之间不可逆的聚集反应。中国人群中PEAR1野生型G基因的基因频率为0.61，突变A基因的基因频率为0.39。突变基因型AA或AG的患者使用阿司匹林时的心肌梗死发生率和死亡率会增高。

现有技术主要存在如下技术问题：缺少一种针对中国人群的、且检测灵敏度高准确率高的阿司匹林个体化用药基因检测试剂盒。

发明内容