[发明专利]一种同时快速检测UGT1A1*6型与UGT1A1*28型基因多态性的试剂盒及方法

说明书

本发明公开了一种同时快速检测UGT1A1*6型与UGT1A1*28型基因多态性的试剂盒及方法，属于基因检测技术领域，用于检测与肿瘤化疗药物伊立替康不良反应相关基因UGT1A1*6型与*UGT1A1*28型基因多态性，包括用于人全血样本快速处理的样本处理试剂、经预混单人份分装的基因检测试剂、阳性对照品和阴性对照品。本发明在保证检出特异性和灵敏的基础之上，实现便捷、快速、高效地检测，减少检测操作步骤、缩减检测反应时间的同时减低了生产成本和检测成本，有利于临床检测分析应用。

技术领域

本发明涉及一种基因多态性检测试剂盒及方法，特别是涉及一种同时快速检测UGT1A1*6型与UGT1A1*28型基因多态性的试剂盒及方法，属于基因检测技术领域。

背景技术

尿苷二磷酸葡萄糖醛酰转移酶(UGTs)是一大类能催化葡萄糖醛酸与亲核底物结合的膜结合酶，主要存在于肝脏和肝外组织内质网，UGT分为两个家族，已经发现有17种人类的基因编码不同序列的UGT，酶的表达具有明显的组织特异性，主要在肝脏中表达，其他组织包括脑、肾、胃肠道等，UDP-葡萄糖醛基转移酶1A1(简称UGT1A1)，参与多种物质的葡萄糖醛基化，这一结合反应的目的在于增加底物的水溶性，增加从胆汁和尿液中的排泄量，达到物质代谢、解毒的目的，UGT1A1基因有30多个等位基因，其中一些SNP可影响酶的功能和分步。

伊立替康是(Irenotecan，CPT-11)是喜树碱半合成衍生物，在体内经羟酸酯酶水解成7-乙基-10-羟基喜树碱(SN-38)，SN-38是DNA拓扑异构酶I的抑制剂，作用于细胞周期S期，抑制、干扰DNA修复和转录，伊立替康自用于临床后，一直是治疗直结肠癌最有效的化疗药物之一，但在临床使用中，也发现伊立替康会导致严重的血液毒性和消化道毒性，表现为腹泻和中性粒细胞减少，发生率可达30％和50％，严重时会导致死亡。

临床研究表明UGT1A1*6型和*UGT1A1*28型与伊立替康引发的副反应有着强相关性，且种族差异，在高加索患者中，UGT1A1*28纯和子(TA7/7)和杂合子(TA6/7)显著增加患者发生严重粒细胞减少和腹泻的风险，而在亚洲患者中，UGT1A1*6型突变显著增加患者发生3-4级中性粒细胞减少、血小板减少及腹泻的风险。

UGT1A1*6型的多态性表现为c.211G>A。亚洲人群中，A/G和A/A携带者在伊立替康治疗中，发生3-4级中性粒细胞减少和非血液学毒性的风险显著提高，UGT1A1*6型突变在亚洲人群中的携带比例高达13-23％，UGT1A1*28多态性是指UGT1A1基因启动子区TA碱基重复序列的多态性，正常野生型为6个TA重复序列(TA6)，而*UGT1A1*28型则含7个TA重复序列(TA7)，根据TA重复序列的多少，可以分为*1/*1、*1/*28和*28/*28。UGT1A1*28纯合突变型在非洲人和高加索人中频率较高达到12-27％和5-15％，在亚洲人中，仅为1.2-5％。

发明内容

本发明的主要目的是为了提供一种同时快速检测UGT1A1*6型与UGT1A1*28型基因多态性的试剂盒及方法，解决现有技术检测UGT1A1*6型与*UGT1A1*28型基因多态性时对样本处理要求高、检测周期长、操作复杂、成本高和特异性不强等不足。

本发明的目的可以通过采用如下技术方案达到：

一种同时快速检测UGT1A1*6型与UGT1A1*28型基因多态性的试剂盒，用于检测与肿瘤化疗药物伊立替康不良反应相关基因UGT1A1*6型与*UGT1A1*28型基因多态性，包括样本处理试剂、基因检测试剂、阳性对照品和阴性对照品。

进一步的，基因检测试剂采用PCR8联管单人份预混分装，包括：

检测UGT1A1*6型引物对：SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.2；

检测UGT1A1*6(211G＞A)型特异性探针SEQ ID NO.3-SEQ ID NO.4；