[发明专利]一种提取橡胶树叶片总DNA的方法在审
| 申请号： | 201811230810.0 | 申请日： | 2018-10-22 |
| 公开（公告）号： | CN109136221A | 公开（公告）日： | 2019-01-04 |
| 发明（设计）人： | 黄关青;李冬青 | 申请（专利权）人： | 海南青峰生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 武汉智权专利代理事务所(特殊普通合伙) 42225 | 代理人： | 张凯 |
| 地址： | 570216 海南省海口市龙*** | 国省代码： | 海南;46 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 提取缓冲液 总DNA 多酚类物质 橡胶树叶片 溶解 氯化钠 聚乙烯吡咯烷酮 细胞质 预处理 葡萄糖 细胞核 低速离心 抗氧化剂 样品分离 植物提取 巯基乙醇 复合物 裂解液 渗透性 稳定剂 裂解 | ||
1.一种提取橡胶树叶片总DNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：
取橡胶树叶片，放在液氮中研成粉末后转入离心管中，在离心管中加入预冷的提取缓冲液，低温离心；
弃去上清液，沉淀中加入55～75℃预热的裂解液，于55～75℃水浴中保温；
加入等体积的酚∶氯仿∶异戊醇混合液，于室温下离心；
上清液转至另一新管中，加入异丙醇，于室温下离心；
以乙醇洗沉淀，沉淀风干后，加入TE缓冲液，溶于微量离心管中，加入核糖核酸酶，于室温下保温；
加入等体积的氯仿∶异戊醇混合液，低温离心；
弃去上清液，加入醋酸钠，混匀后加入无水乙醇，翻转混匀，于-15℃～-25℃中静置；
低温离心，用乙醇洗沉淀，沉淀风干后，将沉淀溶于TE缓冲液中，于-15℃～-25℃下保存。
2.如权利要求1所述的一种提取橡胶树叶片总DNA的方法，其特征在于：橡胶树叶片与提取缓冲液比例为1∶5～1∶7。
3.如权利要求1所述的一种提取橡胶树叶片总DNA的方法，其特征在于：所述提取缓冲液为0.45M的葡萄糖、0.1mM的Tris-HCl、5mM的EDTA、2％质量浓度的聚乙烯吡咯烷酮和2％物质浓度的β-巯基乙醇。
4.如权利要求1所述的一种提取橡胶树叶片总DNA的方法，其特征在于：所述裂解液为2％质量浓度的CTAB、2％质量浓度的聚乙烯吡咯烷酮、1.4M的NaCl、20mM的EDTA、0.1M的Tris-HCl和2％物质浓度的巯基乙醇。
5.如权利要求1所述的一种提取橡胶树叶片总DNA的方法，其特征在于：所述TE缓冲液为10mM的Tris-HCl和1mM的EDTA。
6.如权利要求3～5任意一项所述的一种提取橡胶树叶片总DNA的方法，其特征在于：所述Tris-HCl的PH值为7.1～8.0。
7.如权利要求3～5任意一项所述的一种提取橡胶树叶片总DNA的方法，其特征在于：所述EDTA的PH值为7.1～8.0。
8.如权利要求1所述的一种提取橡胶树叶片总DNA的方法，其特征在于：所述酚∶氯仿∶异戊醇混合液中酚∶氯仿∶异戊醇的体积比为25∶24∶1。
9.如权利要求1所述的一种提取橡胶树叶片总DNA的方法，其特征在于：所述氯仿∶异戊醇混合液中氯仿∶异戊醇的体积比为24∶1。
10.如权利要求1所述的一种提取橡胶树叶片总DNA的方法，其特征在于：所述醋酸钠浓度为3mol/L。
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