[发明专利]一种检测牛乳中不同β-酪蛋白变体型的方法

权利要求书

1.一种检测牛乳中不同β-酪蛋白变体型的方法，其特征在于，所述方法用于检测牛乳中不同β-酪蛋白变体型A1，A2，A3，B，C，E，F，H1，I，同时检测β-酪蛋白多个氨基酸突变位点，所述方法包括：

S1.对待测样品进行蛋白质提取；

S2. 采用胰蛋白酶和V8蛋白酶对提取的蛋白质进行酶解消化；胰蛋白酶和V8蛋白酶加入浓度均为1 μg/μl；

S3. 对蛋白质酶解的肽段进行质谱检测，结合不同氨基酸突变组合对应的变体型鉴定β-酪蛋白的变体型；基于β-酪蛋白不同变体型A1、A2、A3、B、C、E、F、H1、I共发生的8个氨基酸突变位点：GenBank:AAA30431.1的p.51EK、p.52EK、p.82PH、p.103IL、p.108ML、p.121HQ、p.137SR、p.167PL；

其中，步骤S1中，待测样品为生乳样品或奶粉样品。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S1中对待测样品进行蛋白质提取的方法包括：

S1.1 向待测样品中加入裂解液进行冰上裂解，离心；

S1.2 加入二硫苏糖醇进行水浴，然后加入碘乙酰胺静置；

S1.3 对蛋白质进行定量分析并进行凝胶电泳。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，

所述步骤S1.1中，裂解液为尿素和4-羟乙基哌嗪乙磺酸的混合物，所述尿素和4-羟乙基哌嗪乙磺酸的摩尔比为8:0.02~0.04。

4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，

所述步骤S1.1中，裂解液为尿素和4-羟乙基哌嗪乙磺酸的混合物，所述尿素和4-羟乙基哌嗪乙磺酸的摩尔比为8:0.03。

5.如权利要求2所述的方法，其特征在于，

所述步骤S1.2中，

水浴温度控制为55~60℃；静置为暗室静置。

6.如权利要求2所述的方法，其特征在于，

所述步骤S1.2中，

水浴温度控制为56℃。

7.如权利要求2所述的方法，其特征在于，

所述步骤S1.3中，

对蛋白质进行定量分析方法为考马斯亮蓝染色法，凝胶电泳具体为十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S2中，所述方法具体包括：

S2.1 蛋白样品离心去废液后，加入碳酸氢铵调节并稳定pH；

S2.2 加入胰蛋白酶和V8蛋白酶，在35~40℃水温下进行水浴，离心后得消化后肽段；

S2.3 真空抽干消化后的肽段，然后用甲酸复溶肽段。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述步骤S2.2中，加入胰蛋白酶和V8蛋白酶，在37℃水温下进行水浴。

10.如权利要求8所述的方法，其特征在于，

步骤S2.1中，碳酸氢铵加入浓度为25 mM。

11.如权利要求8所述的方法，其特征在于，

步骤S2.3中，甲酸加入浓度为0.1%。

12.权利要求1-11任一项所述方法在检测A2乳品中的应用。