[发明专利]一种检测牛乳中不同β-酪蛋白变体型的方法

说明书

本发明提供一种检测牛乳中不同β‑酪蛋白变体型的方法，所述方法包括：S1.对待测样品进行蛋白质提取；S2.采用胰蛋白酶和V8蛋白酶对提取的蛋白质进行酶解消化；S3.对蛋白质酶解的肽段进行质谱检测，鉴定β‑酪蛋白的变体型。本发明检测方法设计合理，可以有效检测乳品中的不同β‑酪蛋白变体型(A1，A2，A3，B，C，E，F，H1，I)，并且检测准确性高、操作简便。本发明可以对奶牛的终端乳制品进行A2型β‑酪蛋白变体型判定，可规范A2奶乳制品市场。本发明是蛋白检测技术在生产实践上的一次很好应用，能够产生巨大的经济和社会效益。

技术领域

本发明属于动物育种和食品检测技术领域，具体涉及一种同时检测乳品中β-酪蛋白A1、A2、A3、B、C、E、F、H1和I变体型的方法。

背景技术

该部分内容仅提供与本发明有关的背景信息，并不必然构成现有技术。

酪蛋白和乳清蛋白是牛奶中主要的两种蛋白质。其中，酪蛋白约占牛奶中总蛋白质的80％，包括αs1，αs2，β，κ四种类型。β-酪蛋白(β-casein，CSN2)作为氨基酸的重要来源，约占蛋白质总量的30％。由于β-酪蛋白基因中含有多个单核苷酸多态性(SNP)位点，使得β-酪蛋白呈现不同的蛋白变体型。据报道，它至少有12种不同的氨基酸序列组成形式，如A1、A2、A3、B、C、D、E、F、H1、H2、I、G等遗传蛋白变体型。

研究发现不同变体型β-酪蛋白是引起人喝牛奶后腹痛、拉肚子等症状的一个重要原因，这主要在于β-酪蛋白发生碱基变化，导致相应氨基酸的改变，最终影响了人体消化酶对牛奶的消化过程。A2纯合型β-酪蛋白的牛奶简称A2奶，它有助于消除部分人喝牛奶出现肠道反应的症状，有效避免婴幼儿喝牛奶引起的不良反应。

在分子检测方面，已有相关的技术方法能够同时区分β-酪蛋白基因不同的SNP位点，从而在基因水平上间接鉴别不同β-酪蛋白变体型(申请号：201710423750.3；申请号：201710438948.9)。在蛋白检测水平上，还没有同时对乳制品中β-酪蛋白多种变体型进行检测的方法。虽然，发明专利(申请号：2016107841806；申请号2016109833819)公开了检测乳品中A1型β-酪蛋白和A2型β-酪蛋白的方法，但是，这两种蛋白检测方法都仅基于检测一个β-酪蛋白氨基酸突变位点来区分A1和A2奶，由于A2和A3、E、H1、I变体型存在共同的突变位点，如果只检测一个位点会导致假阳性结果。目前，已有A2乳品上市，生产者、消费者和食品监管者迫切需要一种准确、快速的鉴定方法，来鉴定乳品中β-酪蛋白不同的蛋白变体型，进而识别A2奶的真伪。该鉴定技术是保障纯A2高端乳品生产的迫切需求和首要前提，是实现产品质量控制和防止假冒产品的重要基础，对中国奶业的健康发展和食品安全具有重要意义。

发明内容

针对上述现有技术的不足，本发明为更准确、高效的对乳品中β-酪蛋白不同变体型进行鉴定，经过仔细的甄别筛选和大量的试验，得到了一种能够用于检测乳品中不同β-酪蛋白变体型(A1，A2，A3，B，C，E，F，H1，I)的方法。所述检测方法可同时检测多个氨基酸突变位点，而且特异性强、灵敏度高，能够准确的检测乳品中(鲜牛奶、奶粉)不同β-酪蛋白变体型。

本发明的目的之一在于提供一种检测牛乳中不同β-酪蛋白变体型的方法。

本发明的目的之二在于提供上述方法的应用。

为实现上述目的，本发明涉及以下技术方案：

本发明的第一个方面，提供一种检测牛乳中不同β-酪蛋白变体型的方法，所述方法包括：

S1.对待测样品进行蛋白质提取；

S2.采用胰蛋白酶和V8蛋白酶对提取的蛋白质进行酶解消化；

S3.对蛋白质酶解的肽段进行质谱检测，鉴定β-酪蛋白的变体型。

其中，步骤S1中，待测样品包括但不限于生乳样品或奶粉样品；