[发明专利]一种提高酵母抗氧化能力的方法

说明书

本发明公开了一种提高酵母抗氧化能力的方法，属于生物工程领域。本发明用适当浓度的H₂O₂刺激酵母细胞，以96孔板微型液体培养方法筛选生长速度快、活性高的菌株，得到的菌株较出发菌株胞内ROS积累水平减少30％左右，且除一株果酒酵母外，胞内ATP含量上升幅度均超过50％。本发明方法可以有效降低酵母胞内ROS累积量，增加胞内ATP含量，从而达到提高酵母菌株抗氧化能力的目的。

技术领域

本发明涉及一种提高酵母抗氧化能力的方法，属于生物工程领域。

背景技术

酵母是一种重要的工业生产菌株，它具有发酵速度快、生长周期短、可进行大规模培养等优点。酵母在工业生产中会受到各种胁迫压力(如氧化胁迫、高渗透压胁迫、低pH值、高酒精度胁迫、冷或热刺激、饥饿、高浓度SO₂等)的影响，这些胁迫对酵母的生存能力和发酵效力有很大的影响。其中，氧化胁迫是对酵母发酵过程影响最大的胁迫，它主要是由活性氧簇(ROS)的大量积累引起的。

ROS是细胞新陈代谢的主要副产物，它包括H₂O₂、单态氧、羟自由基和超氧化物阴离子等。由于ROS和ATP参与氧化磷酸化过程，这两者在细胞内的存在是必要的。但是，当ROS随时间增加在细胞内累积过多，细胞自身清除内源性ROS的机制已不能将过多的ROS抵消掉，ROS的大量积累损伤胞内大分子物质，使得细胞膜传输、细胞代谢等功能减弱，啤酒酵母的生物活性和发酵能力都会受到严重的影响。ROS诱发的损伤是复杂的并且通常情况下是不可逆转的。尤其是胞内ROS会直接损害线粒体功能，使得线粒体向着更易于产生ROS的方向变化。线粒体与ROS之间恶性循环更加快了细胞老化的速率。ROS的聚集和细胞氧化压力的增加被认定为细胞衰老的重要特征，因此，提高酵母的抗氧化能力有对提高酵母的发酵性能有重要的意义。

发明内容

本发明提供一种提高酵母抗氧化能力的方法，是在酵母生长周期的对数期，使用H₂O₂刺激酵母细胞1～2h，而后，将酵母细胞接种于含有新鲜YPD培养基的96孔板中静置培养，分离单菌落，得到抗氧化能力提高的酵母。

所述酵母包括啤酒酵母、酿酒酵母、果酒酵母、鲁氏酵母。

所述提高抗氧化能力是指减少胞内ROS累积量，增加胞内ATP含量。

具体地，是在酵母生长周期的对数期，使用10mmol/L H₂O₂刺激酵母细胞1～2h，而后接种于含有新鲜YPD培养基的96孔板中，逐级稀释、分离单菌落，得到抗氧化能力提高的酵母。

具体地，将酵母在YPD培养基中培养至对数生长期，收集酵母菌体，用PBS缓冲液稀释至(1～2)×10⁷cfu/mL，再加入H₂O₂，使H₂O₂的终浓度达到10mmol/L，于28℃、180r/min培养1h，取菌液接种于含有新鲜YPD培养基的96孔板中，在28℃静置培养，分离单菌落。

在本发明的一种实施方式中，以胞内ROS含量、胞内ATP含量为检测指标，筛选经过过氧化氢处理后的抗氧化能力提高的酵母。

本发明用不同浓度的H₂O₂刺激酵母细胞，在致死浓度条件下以96孔板微型液体培养方法筛选生长速度快、活性高的菌株，得到的菌株较出发菌株胞内ROS积累水平减少30％左右，且除一株果酒酵母外，胞内ATP含量上升幅度均超过50％。因此，本发明方法可以有效降低酵母胞内ROS累积量，增加胞内ATP含量，从而达到提高酵母菌株抗氧化能力的目的。

附图说明