[发明专利]一种促维生素B12发酵的组合物及其应用

权利要求书

1.一种促维生素B12发酵的组合物，其特征在于：主要由如下质量分数的原料组成：复合前体1-1.55%、复合氨基有机酸2-10%、复合菌体水解液30-40%和自来水50-70%；所述复合前体主要由5,6-二甲基苯并咪唑、烟酰胺单核苷酸和甜菜碱按质量比1:2:2组成；所述复合氨基有机酸主要由苏氨酸、甘氨酸和柠檬酸按质量比2-5:1-3:1-3.5组成；所述复合菌体水解液主要由脱氮假单胞菌水解液和酵母膏按质量比2-3:5-8组成。

2.如权利要求1所述的一种促维生素B12发酵的组合物，其特征在于：所述5,6-二甲基苯并咪唑有效成分含量为90-98%，所述烟酰胺单核苷酸有效成分含量为90-95%，所述甜菜碱有效成分含量为90-98%，所述苏氨酸、甘氨酸、柠檬酸的有效成分含量均≥95%。

3.如权利要求1所述的一种促维生素B12发酵的组合物，其特征在于：所述烟酰胺单核苷酸中杂质三氯磷酸的含量为0.001-0.1wt%。

4.如权利要求1所述的一种促维生素B12发酵的组合物，其特征在于：所述脱氮假单胞菌水解液的制备方法为：选用板框过滤后的脱氮假单胞菌湿菌体，按脱氮假单胞菌湿菌体：98%含量浓硫酸为50:1的比例，在陶瓷反应釜中蒸汽加热沸腾10-30min，冷却后与酵母膏混合，即得。

5.如权利要求1所述的一种促维生素B12发酵的组合物在维生素B12发酵中的应用，其特征在于：所述维生素B12发酵包括以下步骤：

（1）种子培养基的制备：所述种子培养基的配方质量比组成为：麦芽糖3.0-5.0%、玉米浆1-1.5%、硫酸铵0.05-0.15%、磷酸氢二铵0.05-0.25%、硫酸锰0.08-0.1%、氯化钴0.001-0.003%、氧化镁0.01-0.03%、硫酸锌0.0005-0.0015%、碳酸钙 0.1-0.2%和自来水90-95%，所述种子培养基的pH为7.2-7.4；

（2）发酵培养基的的制备：所述步发酵培养基的配方质量比组成为：麦芽糖10-12%、玉米浆1-2%、硫酸铵0.05-0.1%、磷酸二氢钾0.04-0.07%、氯化钴0.006-0.008%、氧化镁0.04-0.05%、硫酸锌0.005-0.008%、碳酸钙0.05-0.12%和自来水80-90%，所述发酵培养基的pH为7.5-8.0；

（3）种子培养：将步骤（1）的种子培养基灭菌、冷却，接种入脱氮假单胞菌生产菌种，于30-32℃振荡培养至菌种种子液中菌体的光密度值OD700达到0.2-0.3；

（4）发酵培养：将所述促维生素B12发酵组合物按照2.0-4.0wt%的添加量加入到步骤（2）的发酵培养基中，然后将发酵培养基于121℃灭菌30min，然后按照10-15% 的接种量接种入步骤（1）中的菌种种子液，于30-32℃进行有氧发酵培养，在发酵过程中补加所述促维生素B12发酵组合物，在补加过程中定时检测甜菜碱含量，维持发酵液中甜菜碱的含量为0.2-0.8%，发酵时间1-9天。