[发明专利]一种通过粘度控制制备肺炎球菌荚膜多糖的方法

权利要求书

1.一种肺炎球菌荚膜多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(a)1型肺炎球菌发酵液经过灭活、离心、澄清过滤后，先进行浓缩，浓缩至粘度达到10cp时，开始透析，透析结束后继续将溶液过浓缩，使用缓冲液冲洗膜包2-3次，收集浓缩液，搅拌均匀，

(b)检测1型多糖溶液粘度，使用缓冲液稀释溶液粘度至10cp进行澄清过滤，过滤完成后使用缓冲液继续稀释至粘度为5cp，持续搅拌状态添加CTAB溶液，

(c)将CTAB多糖溶液进行离心，收集沉淀，置于氯化钠溶液中持续搅拌，当粘度增加至5cp时添加氯化钠溶液至粘度为3cp；增加至5cp时再次添加氯化钠溶液至粘度为3cp，直至粘度不再上升时解聚过程结束，

(d)多糖解聚溶液进行离心、澄清后，进行超滤，同步骤(a)，浓缩至粘度达到10cp时，开始透析，透析结束后继续将溶液过浓缩，使用缓冲液冲洗膜包2-3次，收集浓缩液，搅拌均匀，在20cp的粘度下进行澄清过滤，过滤完成后使用缓冲液冲洗滤器，收集冲洗液，再添加缓冲液至溶液粘度15cp，

(e)将溶液进行层析纯化，收集的层析组分同步骤(a)进行超滤，浓缩至粘度达到10cp时，开始透析，透析结束后继续将溶液过浓缩，使用缓冲液冲洗膜包2-3次，收集浓缩液，搅拌均匀，在15cp的粘度下进行澄清过滤，过滤完成后使用缓冲液冲洗滤器，收集冲洗液，搅拌均匀后冻干。

2.一种肺炎球菌荚膜多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(a)2型肺炎球菌发酵液经过灭活、离心、澄清过滤后，先进行浓缩，浓缩至粘度达到8cp时，开始透析，透析结束后继续将溶液过浓缩，使用缓冲液冲洗膜包2-3次，收集浓缩液，搅拌均匀，

(b)检测2型多糖溶液粘度，使用缓冲液稀释溶液粘度至8cp进行澄清过滤，过滤完成后使用缓冲液继续稀释至粘度为3cp，持续搅拌状态添加CTAB溶液，

(c)将CTAB多糖溶液进行离心，收集沉淀，置于氯化钠溶液中持续搅拌，当粘度增加至3cp时添加氯化钠溶液至粘度为2cp；增加至3cp时再次添加氯化钠溶液至粘度为2cp，直至粘度不再上升时解聚过程结束，

(d)多糖解聚溶液进行离心、澄清后，进行超滤，同步骤(a)，浓缩至粘度达到8cp时，开始透析，透析结束后继续将溶液过浓缩，使用缓冲液冲洗膜包2-3次，收集浓缩液，搅拌均匀，在15cp的粘度下进行澄清过滤，过滤完成后使用缓冲液冲洗滤器，收集冲洗液，再添加缓冲液至溶液粘度12cp，

(e)将溶液进行层析纯化，收集的层析组分同步骤(a)进行超滤，浓缩至粘度达到8cp时，开始透析，透析结束后继续将溶液过浓缩，使用缓冲液冲洗膜包2-3次，收集浓缩液，搅拌均匀，在10cp的粘度下进行澄清过滤，过滤完成后使用缓冲液冲洗滤器，收集冲洗液，搅拌均匀后冻干，即得。

3.一种肺炎球菌荚膜多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(a)3型肺炎球菌发酵液经过灭活、离心、澄清过滤后，先进行浓缩，浓缩至粘度达到10cp时，开始透析，透析结束后继续将溶液过浓缩，使用缓冲液冲洗膜包2-3次，收集浓缩液，搅拌均匀，

(b)检测3型多糖溶液粘度，使用缓冲液稀释溶液粘度至10cp进行澄清过滤，过滤完成后使用缓冲液继续稀释至粘度为5cp，持续搅拌状态添加CTAB溶液，

(c)将CTAB多糖溶液进行离心，收集沉淀，置于氯化钠溶液中持续搅拌，当粘度增加至5cp时添加氯化钠溶液至粘度为3cp；增加至5cp时再次添加氯化钠溶液至粘度为3cp，直至粘度不再上升时解聚过程结束，

(d)多糖解聚溶液进行离心、澄清后，进行超滤，同步骤(a)，浓缩至粘度达到10cp时，开始透析，透析结束后继续将溶液过浓缩，使用缓冲液冲洗膜包2-3次，收集浓缩液，搅拌均匀，在20cp的粘度下进行澄清过滤，过滤完成后使用缓冲液冲洗滤器，收集冲洗液，再添加缓冲液至溶液粘度15cp，

(e)将溶液进行层析纯化，收集的层析组分同步骤(a)进行超滤，浓缩至粘度达到10cp时，开始透析，透析结束后继续将溶液过浓缩，使用缓冲液冲洗膜包2-3次，收集浓缩液，搅拌均匀，在15cp的粘度下进行澄清过滤，过滤完成后使用缓冲液冲洗滤器，收集冲洗液，搅拌均匀后冻干。