[发明专利]一种从尿液中提取多种尿蛋白的方法

说明书

本发明提供一种从尿液中提取多种尿蛋白的方法，所述方法利用特定吸附剂对尿液中多种蛋白质的同时亲和捕获与从吸附剂上的分阶段特定洗脱，包括以下步骤：1)收集尿液，进行透析、离心和过滤；2)制备Cibacron Blue F3‑GA‑琼脂糖凝胶亲和吸附剂，装柱并平衡；3)将尿液上样，静置；4)分阶段洗脱，收集各个阶段的洗脱级分。本发明的方法能够从同一批尿液中平行地一次提取出不少于八种高价值的尿蛋白，显著提高了尿蛋白的分离提取效率，使尿液作为特定生物资源得到充分利用。

技术领域

本发明涉及蛋白提取技术，更具体而言，本发明涉及一种从尿液中提取多种尿蛋白的方法。

背景技术

一个健康成人每天排出体外的尿液平均为1.5升，因此城市每天(24小时)排出体外的尿液量是非常巨大的数字，而人类的尿液里含有多达1500余种蛋白质，其中很多蛋白质有相当高的科研、医疗和经济价值。因此，如果能从人尿液中分离提取并纯化尿蛋白，经济价值将相当可观；并且，处理后的尿液残渣还可以作为农业有机肥料使用，变废为宝，同时还解决了尿液产生的环境问题。

现在从人尿液中分离提取的尿蛋白一般仅限于四种：尿激酶、人尿胰蛋白酶抑制剂乌司他丁、白蛋白和β2-微球蛋白，另有少数企业能够从孕妇的尿液中分离提取出人绒毛膜促性腺激素(简称hCG)，但是限于原料不易获取，所以生产成本较高。目前已知的从尿液中分离提取尿蛋白的生产工艺都只能从一批尿液中同时提取出最多两种蛋白质，一般仅能够从同一批尿液中分离提取出一种尿蛋白；并且，这些生产工艺往往粗制和精制合一，纯化一种尿蛋白只能从头做到底，没有选择的余地，不能根据市场的要求有效、灵活地调整生产的具体产品的类型和产量。

因此，本领域仍需要能够从尿液中同时提取多种尿蛋白的方法。

发明内容

本发明要解决的技术问题是，提供一种从尿液中提取多种蛋白质的方法，特别是该方法能够从同一批次尿液中吸附和洗脱出多种尿蛋白，从而使尿液作为特定生物资源得到充分利用；同时，考虑到获取的尿蛋白的多样性和专一性之间的关系，该方法还能够通过限制吸附的尿蛋白的数量，使得洗脱液中所包含的不同种类的尿蛋白数量适当，容易用分子筛层析或离子交换层析加以分离为单一种类的尿蛋白，为最终的精制提供很有价值的基础。

为了解决上述技术问题，本发明的发明人提供一种从尿液中提取多种尿蛋白的方法，该方法主要利用特定吸附剂对尿液中多种蛋白质的同时亲和捕获与从吸附剂上的分阶段特定洗脱。具体而言，本发明的方法包括以下步骤：

1)收集尿液，进行透析、离心和过滤；

2)制备Cibacron Blue F3-GA-琼脂糖凝胶亲和吸附剂，装柱并平衡；

3)将尿液在亲和层析柱上样，上样后在室温下静置；

4)分阶段洗脱，收集各个阶段的洗脱级分。

根据本发明的方法，步骤1)中，所述尿液为哺乳动物尿液，优选为人的尿液；根据本发明的具体实施方式，从可建立有特殊的收集装置的公共厕所收集人排出体外的尿液，对所述尿液进行过滤，所述过滤采用10nm≤孔径≤15nm的纳滤膜进行，或者所述过滤先采用20nm≤孔径的超滤膜进行，然后再采用10nm≤孔径≤15nm的纳滤膜进行。

步骤1)中，所述透析可以是自由扩散透析或搅拌透析，例如参见余瑞元等人，《生物化学实验原理与方法》，北京大学出版社，2005，第二版。