[发明专利]重组纤维素内切酶基因及其蛋白和蛋白制备方法

权利要求书

1.重组纤维素内切酶基因，其特征在于，所述基因的序列为序列表中SEQ ID NO.1的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的基因编码得到的纤维素内切酶。

3.根据权利要求2所述的纤维素内切酶，其特征在于：所述纤维素内切酶的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO.2所示。

4.含有权利要求1所述基因的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌。

5.根据权利要求4所述的重组载体，由空载体和插入该空载体的目的基因组成，其特征在于，所述目的基因为权利要求1所述的基因。

6.根据权利要求5所述的重组载体，其特征在于，所述空载体为pET28载体。

7.一种权利要求2或3所述的重组纤维素内切酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将权利要求1所述的基因重组到构建到pET28载体中；再转化到大肠杆菌菌株中，得到表达株；

2)将步骤1)表达株在LB液体培养基中培养，并加入0.1～0.5mM的IPTG诱导，发酵完毕，超声破碎，离心取上清，得可溶性重组的纤维素内切酶。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，还包括蛋白纯化步骤：用DEAE层析柱对步骤2)得到的上清液进行纯化，先用平衡缓冲液平衡层析柱，再将上清液过柱，用含20mMNa₂HPO₄，20～30mM NaCl，pH7.0缓冲液预洗柱子，然后用含100mM～200mM NaCl，20mMNa₂HPO₄，pH7.0缓冲液溶液将蛋白洗脱下来即可。

9.根据权利要求7或8所述制备方法得到的蛋白。

10.权利要求1所述基因、权利要求2、3或9所述蛋白、权利要求4所述重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌在生物燃料乙醇的生产、食品、饲养和/或印染领域中的应用。