[发明专利]一种骨钙素检测试剂的校准品及其制备方法

说明书

本发明属于医学体外诊断领域，具体涉及一种骨钙素检测试剂的校准品及其制备方法。本发明制备的骨钙素检测试剂的校准品，由于加入赋形剂、表面活性剂、稳定剂、防腐剂组成的复合保护物质，使得校准品稳定性好，在室温条件下可稳定1个月，在‑20℃下可稳定1年，储存有效期长，所述制备方法可溯源至国际或国内参考物质，确保临床检验结果的准确性。本发明提供的稳定的骨钙素检测试剂的校准品适于工业化大规模生产，解决校准品保存不稳定的困难，同时降低了生产成本。

技术领域

本发明属于医学体外诊断领域，具体涉及一种骨钙素检测试剂的校准品及其制备方法。

背景技术

骨钙素是骨基质中最重要的一种特异性非胶原蛋白，由骨和牙齿中的成骨细胞合成并分泌，其与骨钙的结合作用依赖于维生素K。骨钙素分子含49个氨基酸，分子量约为5800D。在骨合成中，成骨细胞产生骨钙素，此过程依赖于维生素K，同时维生素D3有促进产生骨钙素的作用。使用维生素K拮抗剂，可使此蛋白在骨中的含量减少，但并不影响其脯氨酸的含量，也不影响骨的机械强度。骨钙素产生后一部分进入骨基质，另一部分释放进入外周血。因此，血清(血浆)中骨钙素的含量与各种骨代谢紊乱中骨转化率有关。完整的骨钙素包含49个氨基酸，1-43氨基酸的片段为N-中端骨钙素(N-MID)。完整的骨钙素在外周血中不稳定，羧基端的43-44间的氨基酸易被蛋白酶水解，裂解下来的N-MID则稳定的多。因此，测定血清(血浆)中的稳定N-MID，从而确保检测结果的稳定性。

为了实现这种方法，需要与之相配套的校准品。目前制备校准品大多采用血清基质真空冷冻干燥所得。但血清基质仍存在一些问题。主要是其成份复杂、含量及其作用机制仍不清楚，尤其是对其中一些多肽类生长因子、激素和脂蛋白类等物质尚未充分认识，对实验会产生一定的影响；其次血清都是批量生产，各批量之间会存在一定差异，而且血清保存期也需要被考虑，容易引起细菌等污染，导致保质期缩短，因此，要保证每批血清的一致性较为困难，从而使实验的标准化受到一定的限制；而且进口血清的价格相对较高，因此选择血清作为基质成分，需要考虑的因素非常多，对实际应用产生了很大的限制。另一方面血清容易被细菌污染，因此会为校准品的效期稳定性带来一定的风险，高品质的血清价格也相对较高，会增加最终校准品的成本。

发明内容

本发明要解决现有技术中的技术问题，提供一种骨钙素检测试剂的校准品及其制备方法，本发明以缓冲液为基质，通过对缓冲液种类及冻干保护剂的筛选，制备出了稳定性好、准确度高的骨钙素检测试剂校准品。本发明工艺简单、缓冲液基质替代了价格昂贵的血清基质大大降低了生产成本。

为了解决上述技术问题，本发明的技术方案具体如下：

一种骨钙素检测试剂的校准品的制备方法，包括以下步骤：

(a)、配制缓冲液；

(b)、将冻干保护剂和不同浓度的降钙素，加入步骤(a)获得的缓冲液中；

(c)、将步骤(b)中获得的缓冲液混合物进行冷冻干燥，由此获得所述校准品；

所述缓冲液为磷酸氢二钠-柠檬酸、MOPSO和巴比妥那-盐酸缓冲液中的一种或几种；

所述冻干保护剂是由氨基酸类保护剂、蛋白类保护剂、糖类保护剂、多元醇、表面活性剂及防腐剂组成的混合物。

在上述技术方案中，所述缓冲液为pH为6.5-7.5、浓度为10mM-20mM的MOPSO缓冲液。

在上述技术方案中，所述缓冲液为pH为7.5、浓度为10mM的MOPSO缓冲液。

在上述技术方案中，

所述氨基酸类保护剂为甘氨酸、谷氨酸、精氨酸和组氨酸中的一种或几种的混合物；

所述蛋白类保护剂为牛血清白蛋白、人血清白蛋白、酪蛋白、卵清蛋白中的一种或几种的混合物；