[发明专利]基于肠道模拟模型的乳酸菌对肠道益生作用的测定方法

权利要求书

1.一种基于肠道模拟模型的乳酸菌对肠道益生作用的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、活化清酒乳杆菌LZ217，得到活化后的清酒乳杆菌LZ217；

步骤2、在肠道模拟培养基中添加活化后的清酒乳杆菌LZ217，同时，设置不添加作为对照，得到添加清酒乳杆菌LZ217的肠道模拟培养基和不添加清酒乳杆菌LZ217的肠道模拟培养基，之后加入处理后的志愿者粪便样品进行模拟培养，培养后获得发酵液，发酵液离心后吸取上清，得到上清液；

步骤3、将步骤2获得的上清液用于气相色谱分析，检测短链脂肪酸。

2.根据权利要求1所述的基于肠道模拟模型的乳酸菌对肠道益生作用的测定方法，其特征在于，步骤1中，所述的活化清酒乳杆菌LZ217包括：

将保藏的活化清酒乳杆菌LZ217在平板MRS固体培养基上划线，放于26℃～34℃培养箱中培养30h～42h，挑取单菌落至MRS液体培养基中活化1到4次，得到活化后的清酒乳杆菌LZ217。

3.根据权利要求2所述的基于肠道模拟模型的乳酸菌对肠道益生作用的测定方法，其特征在于，步骤1中，所述的平板MRS固体培养基，以1L计，由以下原料制成：

将上述组分混合，用水定容至1L，调节pH至7.0，之后加入15g琼脂，在121℃灭菌15min；

所述的MRS液体培养基以1L计，由以下原料制成：

将上述组分混合，用水定容至1L，调节pH至7.0，调节pH至7.0，之后在121℃灭菌15min。

4.根据权利要求1所述的基于肠道模拟模型的乳酸菌对肠道益生作用的测定方法，其特征在于，步骤2中，所述的肠道模拟培养基，由以下原料制成：

将上述组分混合，补加水定容至1000mL，121℃灭菌15min，得到肠道模拟培养基。

5.根据权利要求1所述的基于肠道模拟模型的乳酸菌对肠道益生作用的测定方法，其特征在于，步骤2中，处理后的志愿者粪便样品的制备包括：

取志愿者晨起新鲜粪便，加入PBS缓冲液，充分均匀，用金属滤网过滤，得到均匀的滤液，即为处理后的志愿者粪便样品。

6.根据权利要求1所述的基于肠道模拟模型的乳酸菌对肠道益生作用的测定方法，其特征在于，步骤2中，所述的模拟培养的条件为：恒温30℃～40℃培养36h～50h后。

7.根据权利要求1所述的基于肠道模拟模型的乳酸菌对肠道益生作用的测定方法，其特征在于，步骤2中，所述的发酵液离心的条件为：在10000rpm～14000rpm离心2min～8min。

8.根据权利要求1所述的基于肠道模拟模型的乳酸菌对肠道益生作用的测定方法，其特征在于，步骤3中，将步骤2获得的上清液用于气相色谱分析具体包括：

上清液采用滤膜过滤，取过滤后的上清，加入巴豆酸，震荡混匀，得到混合液，取混合液于进样瓶中进样气相色谱检测。

9.根据权利要求1所述的基于肠道模拟模型的乳酸菌对肠道益生作用的测定方法，其特征在于，步骤3中，所述的气相色谱检测的条件为：

升温程序为：柱温：60℃～80℃保持0.5min～2min，以10～20℃/min，升至170℃～190℃，保持1min～3min，以35～45℃/min升至230℃～250℃保持2min～5min。

10.根据权利要求1所述的基于肠道模拟模型的乳酸菌对肠道益生作用的测定方法，其特征在于，步骤3中，所述的短链脂肪酸为丁酸。