[发明专利]基于肠道模拟模型的乳酸菌对肠道益生作用的测定方法

说明书

本发明公开了一种基于肠道模拟模型的乳酸菌对肠道益生作用的测定方法，包括以下步骤：活化清酒乳杆菌LZ217；在肠道模拟培养基中添加活化后的清酒乳杆菌LZ217，同时，设置不添加作为对照，之后加入处理后的志愿者粪便样品进行模拟培养，培养后获得发酵液，发酵液离心后吸取上清，得到上清液；将上清液用于气相色谱分析，检测短链脂肪酸。本发明中，可以检测分析清酒乳杆菌LZ217对志愿者肠道菌群变化和短链脂肪酸代谢情况，并且，通过体外模拟发酵克服了对肠道细菌取样困难的问题，排除了宿主因素。

技术领域

本发明涉及检测方法技术领域，具体涉及一种基于肠道模拟模型的乳酸菌对肠道益生作用的测定方法。

背景技术

乳酸菌(lactic acid bacteria，LAB)是一类能利用可发酵碳水化合物产生大量乳酸的细菌的通称。LAB主要包括乳球菌属、链球菌属、肠球菌属、明串珠菌属和乳杆菌属等18种属。LAB的特点是非致病性、革兰氏阳性、阴性过氧化氢酶、无芽孢、兼性厌氧和专性厌氧。乳酸菌可以定居于胃肠道并长期发挥其有益作用，且不需要持续的医疗手段进行干预，由于人们对降低医疗成本的需求，乳酸菌目前已成为应用最为广泛的益生菌，在食品工业中发挥巨大的作用。

肠道微生物就是我们通常所说的“肠道菌群”，这类微生物数量超过人体自身细胞的10倍以上，对营养物质代谢、人体自身发育、免疫及疾病的产生等方面都起到极其重要的作用。近年来不断有研究发现体内微生物在许多慢性疾病和症状中，如炎症、肥胖等也起了关键作用。

研究表明益生菌可影响肠道菌群，通过口服益生菌的方式可快速改变宿主肠道菌群的结构。这可能是由于人们在摄入富含益生菌的产品以后，大量活性益生菌被直接送到人体肠道中，从而使肠道菌群的构成在短时间内产生了较大变化。除此之外，益生菌进入肠道后会通过代谢作用杀灭部分致病菌，并促进部分有益菌的生长，在一定程度上改变宿主肠道菌群的构成。

另外，研究表明，益生菌的摄入会对短链脂肪酸代谢水平产生影响。短链脂肪酸又名挥发性脂肪酸，这类脂肪酸的碳链长度在1-6之间，常见的短链脂肪酸包括乙酸、丙酸和丁酸。其主要由结肠中的厌氧菌发酵碳水化合物或降解蛋白质产生。粪便短链脂肪酸包括糖酵解的短链脂肪酸：乙酸、丙酸、丁酸，以及蛋白酵解的短链脂肪酸：异丁酸、戊酸、异戊酸。一般正常人群粪便中糖酵解的短链脂肪酸占总酸的90％左右，而蛋白酵解的短链脂肪酸占总酸的10％以下。所有的短链脂肪酸都有提高免疫力，改善肠道功能和预防肠道癌变的能力。丁酸是肠上皮细胞的能量之源，具有抗氧化、降低免疫系统炎症反应，预防肠道癌症发生的功能。在多种疾病状态下，粪便中短链脂肪酸水平会偏离正常范围。

申请公布号为CN 105028661A(申请号为201510311918.2)的中国发明专利申请公开了一种高产叶酸的乳酸菌菌株制作豆浆发酵乳的制作方法，包括以下步骤：步骤a，菌种活化，将菌种清酒乳杆菌LZ217(Lactobacillus sakei LZ217)、用MRS培养基进行活化，传代3次后使用；步骤b，接入菌种准备，收集生长到对数期的清酒乳杆菌LZ217，离心，弃去上清液后收集菌体；在无菌环境下加入纯净水制成菌种悬液；以1％的接入量接种到牛奶培养基中，置于人工气候箱培养，传代3次后使用；步骤c，制作豆浆发酵乳，将准备好的乳酸菌按1％的接种量接入凉好的新鲜豆浆中，向豆浆中加入葡萄糖和果糖后加盖封口，并置于恒温培养箱中培养。该技术方案只公开了清酒乳杆菌LZ217，检测乳酸菌对肠道益生作用在该方案中没有涉及。

因此，建立一种快速、便捷地检测乳酸菌对肠道益生作用的方法显得尤为重要，具有广大应用前景。

发明内容

为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的目的在于提供一种基于肠道模拟模型的乳酸菌对肠道益生作用的测定方法，通过体外模拟发酵克服了对肠道细菌取样困难的问题，排除了宿主因素。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种基于肠道模拟模型的乳酸菌对肠道益生作用的测定方法，包括以下步骤：