[发明专利]一种莲芝消炎胶囊HPLC特征图谱及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种莲芝消炎胶囊HPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)供试品溶液制备：取莲芝消炎胶囊研细，向细粉中加入甲醇超声提取，摇匀，滤过，取续滤液，得到供试品溶液；

(2)对照品溶液制备：取穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯对照品，加入甲醇溶解，得到对照品溶液；

(3)阴性样品溶液制备：分别取穿心莲干浸膏、山芝麻干浸膏研细，向细粉中加入甲醇超声提取，摇匀，滤过，取续滤液，得到穿心莲阴性样品溶液和山芝麻阴性样品溶液；

(4)高效液相色谱检测，构建莲芝消炎胶囊HPLC特征图谱；

所述步骤(4)中色谱条件为：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶填充色谱柱；流动相：以乙腈为流动相A，以0.01％～0.2％磷酸水溶液为流动相B进行梯度洗脱，所述梯度洗脱条件为：0～5min，流动相中A(3％～7％→18％～22％)，流动相中B(93％～97％→78％～82％)；5～15min，流动相中A(18％～22％→28％～32％)，流动相中B(78％～82％→68％～72％)；15～25min，流动相中A(28％～32％→33％～35％)，流动相中B(68％～72％→65％～67％)；25～30min，流动相中A(33％～35％→36％～38％)，流动相中B(65％～67％→62％～64％)；30～45min，流动相中A(36％～38％→38％～40％)，流动相中B(62％～64％→60％～62％)；柱温：25～35℃；流速：0.8～1.2ml/min；检测波长：225nm；理论板数：按穿心莲内酯峰计算不低于5000；分别精密吸取对照品溶液、阴性样品溶液和供试品溶液各10～50μl，注入高效液相色谱仪，测定；

所述步骤(1)中莲芝消炎胶囊细粉与甲醇的质量体积比为(0.1～2.0)g：(10～50)ml；

所述步骤(2)获得的对照品溶液中，穿心莲内酯浓度为0.1mg/ml～4.0mg/ml，脱水穿心莲内酯浓度为0.1mg/ml～4.0mg/ml；

所述步骤(3)中穿心莲干浸膏细粉与甲醇的质量体积比为(0.04～1.0)g：(10～20)ml；所述山芝麻干浸膏细粉与甲醇的质量体积比为(0.04～1.0)g：(10～20)ml。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(4)中构建莲芝消炎胶囊HPLC特征图谱的方法为：(1)通过对照品溶液、阴性样品溶液和供试品溶液色谱图中的色谱峰出峰时间和色谱峰是否存在进行比较，对供试品溶液图谱中的共有特征峰进行指认，得到11个共有特征峰；(2)对10批莲芝消炎胶囊样品进行HPLC检测，采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件生成由11个共有特征峰构成的莲芝消炎胶囊HPLC特征图谱。

3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述莲芝消炎胶囊HPLC特征图谱包括11个共有特征峰，其中，1～6号峰为未知成分峰，属于山芝麻；7～11号峰属于穿心莲，其中，7号峰为穿心莲内酯峰，11号峰为脱水穿心莲内酯峰，其他为未知成分峰；以穿心莲内酯参照峰7号峰为参照峰，各特征峰的相对保留时间为：1号峰：0.33±0.033；2号峰：0.40±0.040；3号峰：0.50±0.050；4号峰：0.70±0.070；5号峰：0.71±0.071；6号峰：0.80±0.080；7号峰：1.00±0.10；8号峰：1.07±0.107；9号峰：1.49±0.149；10号峰：1.76±0.176；11号峰：1.82±0.182。

4.根据权利要求1～3任一项所述的构建方法构建的莲芝消炎胶囊HPLC特征图谱在莲芝消炎胶囊检测中的应用。

5.一种莲芝消炎胶囊检测方法，其特征在于，利用高效液相色谱法检测得到待测莲芝消炎胶囊HPLC图谱，采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件与莲芝消炎胶囊HPLC特征图谱进行分析，相似度大于0.90为合格产品；包括以下步骤：1)取待测莲芝消炎胶囊样品，研细，向细粉中加入甲醇超声提取，摇匀，滤过，取续滤液，得到供试品溶液；利用高效液相色谱法检测得到待测莲芝消炎胶囊HPLC图谱，所述色谱条件为：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶填充色谱柱；流动相：以乙腈为流动相A，以0.01％～0.2％磷酸水溶液为流动相B进行梯度洗脱，所述梯度洗脱条件为：0～5min，流动相中A(3％～7％→18％～22％)，流动相中B(93％～97％→78％～82％)；5～15min，流动相中A(18％～22％→28％～32％)，流动相中B(78％～82％→68％～72％)；15～25min，流动相中A(28％～32％→33％～35％)，流动相中B(68％～72％→65％～67％)；25～30min，流动相中A(33％～35％→36％～38％)，流动相中B(65％～67％→62％～64％)；30～45min，流动相中A(36％～38％→38％～40％)，流动相中B(62％～64％→60％～62％)；柱温：25～35℃；流速：0.8～1.2ml/min；检测波长：225nm；理论板数：按穿心莲内酯峰计算不低于5000；精密吸取待测莲芝消炎胶囊样品制备得到的供试品溶液10～50μl，注入高效液相色谱仪，测定；2)将步骤1)获得的待测莲芝消炎胶囊HPLC图谱，采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件与莲芝消炎胶囊HPLC特征图谱进行分析，相似度大于0.90为合格产品；所述莲芝消炎胶囊HPLC特征图谱包括11个共有特征峰，其中，1～6号峰为未知成分峰，属于山芝麻；7～11号峰属于穿心莲，其中，7号峰为穿心莲内酯峰，11号峰为脱水穿心莲内酯峰，其他为未知成分峰；以穿心莲内酯参照峰7号峰为参照峰，各特征峰的相对保留时间为：1号峰：0.33±0.033；2号峰：0.40±0.040；3号峰：0.50±0.050；4号峰：0.70±0.070；5号峰：0.71±0.071；6号峰：0.80±0.080；7号峰：1.00±0.10；8号峰：1.07±0.107；9号峰：1.49±0.149；10号峰：1.76±0.176；11号峰：1.82±0.182；3)根据步骤2)的比对结果判定待测莲芝消炎胶囊样品的质量和/或真伪。