[发明专利]一种用于大肠杆菌裂解液澄清的方法

权利要求书

1.一种用于大肠杆菌裂解液澄清的方法，其特征在于，采用固定化核酸酶水解大肠杆菌裂解液中的核酸；

其中，所述固定化核酸酶的制备方法为：

A1、取正硅酸乙酯、蒸馏水和无水乙醇混匀，且体积比为1～2.5:1:1，得混合液Ⅰ；

A2、取Fe3O4磁性纳米粒子加至混合液Ⅰ中，加入质量分数为26%的氨水催化，在磁场中搅拌8～12h，得混合液Ⅱ；

A3、取混合液Ⅱ于磁力架上静置10min，过滤取滤渣用超纯水反复洗涤至洗涤液为中性，在40～60℃条件下真空干燥6～10h，得磁性二氧化硅纳米粒；

A4、取3-氨丙基甲基二乙氧基硅烷的乙醇溶液加至磁性二氧化硅纳米粒中，同时加入偶氮二异丁腈，反复搅拌2～4h，静置3～6h，得表面改性接枝处理的磁性二氧化硅纳米粒溶液，即溶液Ⅰ；

A5、在溶液Ⅰ中加入核酸酶，在37℃下超声波振荡反应10～15min，再过滤取沉淀物在45～55℃下烘干，冷却得固定化核酸酶，所述核酸酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述的用于大肠杆菌裂解液澄清的方法包括以下步骤：

B1、按每100mL大肠杆菌裂解液加入4～8g的量加入固定化核酸酶，在37℃下恒温水浴2～4h并不断搅拌；

B2、采用磁力架进行磁分离2～5min，得溶液Ⅱ；

B3、将溶液Ⅱ过滤，取滤渣用超纯水洗涤，将洗涤水倒入滤液中混匀，洗涤后的滤渣和混匀后滤液即分别为回收的固定化核酸酶和澄清后的大肠杆菌裂解液。

2.根据权利要求1所述的用于大肠杆菌裂解液澄清的方法，其特征在于，步骤A5中,所述超声波振荡的频率为20kHz～30kHz。

3.根据权利要求1所述的用于大肠杆菌裂解液澄清的方法，其特征在于，步骤A5中,烘干温度为45℃。

4.根据权利要求1所述的用于大肠杆菌裂解液澄清的方法，其特征在于，步骤B1中，按每100mL大肠杆菌裂解液加入5.8g的量加入固定化核酸酶。