[发明专利]一种测定北芪菇中黄芪苷含量的方法

权利要求书

1.一种测定北芪菇中黄芪苷含量的方法，其特征在于，以北芪菇为原料，微波超声波萃取仪辅助处理后，采用萃取法对黄芪苷进行粗提取，经薄层层析法分离纯化后，采用双波长薄层扫描法测定北芪菇中黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的含量，其中，以70%的乙醇为提取剂，料液比为1:25，经微波超声波辅助萃取仪辅助处理后获得黄芪苷粗提取液，以氯仿：甲醇：乙酸乙酯：水的体积比13:7:2:2为展开剂，经薄层层析展开分离纯化黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，采用光谱扫描确定黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的测定波长与参比波长，再用反射扫描法测定各个斑点的吸收峰峰面积积分值，根据黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ标准品吸收峰峰面积积分值与标准品量的线性关系，用外标两点法测定其含量，具体过程如下：

步骤a，以北芪菇粉为原料，分别加入70%乙醇，料液比为1:25，50℃下振荡浸提，超声波微波萃取仪分三阶段提取，每阶段5min，共15min，超声波频率为50KHz，电机转速900r/min，提取液于4000r/min下离心10min，上清液过滤、浓缩，石油醚去杂后，用饱和正丁醇萃取，合并上层溶液、浓缩至无液体溢出时用甲醇将其定容备用；

步骤b，将黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅲ标准品加于色谱纯的甲醇中，超声条件下充分溶解后制得1mg/mL的标准品溶液，置于2～4℃的冰箱中保存备用；

步骤c，将层析板加热活化，用微量进样器分别吸取北芪菇、正北芪供试品溶液及标准品溶液25μL，依次点样供试液3-4μL，标准品溶液2μL、3μL、6μL，以氯仿：甲醇：乙酸乙酯：水的体积比13:7:2:2静置过夜的下相为供试品展开剂，密封后，预饱和20min，放入层析缸中上行展开，待展开前沿距层析板顶端1cm处时，取出层析板晾干，均匀喷10%的硫酸乙醇溶液，于105℃加热至显色清晰为止，用玻璃板覆盖，四周胶布固定，紫外365nm下检视，薄层色谱成像系统拍照，并标记；

步骤d，将层析板放入薄层色谱扫描仪中，确定背景及各个黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ斑点的横、纵坐标，采用光谱扫描确定黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的测定波长与参比波长，再用反射扫描法测定各个斑点的吸收峰峰面积积分值，根据黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ吸收峰峰面积积分值与标准品量的线性关系，用外标两点法测定其含量。