[发明专利]一种测定北芪菇中黄芪苷含量的方法

说明书

本发明公开了一种测定北芪菇中黄芪苷含量的方法，涉及北芪菇中活性物质提取和含量测定领域，以北芪菇为原料，以乙醇为提取剂，料液比为1:25，经微波超声波辅助获得黄芪苷粗提取液，以氯仿：甲醇：乙酸乙酯：水的体积比13:7:2:2为展开剂，经薄层层析展开分离纯化，采用光谱扫描确定的测定波长与参比波长，再用反射扫描法测定各个斑点的吸收峰峰面积积分值，根据标准品吸收峰峰面积积分值与量的线性关系，用外标两点法测定黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ含量，双波长薄层扫描法使目标物质充分溶解于提取剂中，扫描法可基本消除铺板不均产生的误差，扫描基线稳定，不造成目标物质的损失，且操作简单、用时短，具有提取效率高，可定性分析准确性高。

技术领域

本发明涉及北芪菇中活性物质的提取与含量测定领域，具体为一种测定北芪菇中黄芪苷含量的方法。

背景技术

北芪菇，担子菌门下伞菌目侧耳属平菇，将正北芪、多种中草药、农作物副产品作培养料，采用科学的配方和特殊的工艺多年培育而成的新型侧耳属平菇，是山西浑源富硒地区开发的新型食用菌。根据生物富集作用，北芪菇内含浑源黄芪的药理成分，在生长发育过程中对黄芪苷有一定程度的富集。北芪菇中含有多种人体必需的氨基酸、多糖蛋白、抗生素、牛黄酸、菌糖、多种酶、维生素以及硒元素，是全能营养型的食用菌，其营养成份远超于普通平菇，含有较高的食用价值和药用价值。北芪菇具有较强的生物转化作用，其重要的代谢产物，如蛋白多糖、抗生素、微量牛黄酸有抗肿瘤、抗菌消炎、降低血压和防治脑血管障碍等作用，菌多糖和甘露糖有益于调理胃肠作用，以及含有帮助消化的各种酶等。在补气固表、润肤、脱毒排脓、有强身健体、保护肝脏等有较为显著的作用，尤其是在治愈银霄病和其它瘙痒性皮肤病有特殊的功效。另外，北芪菇是一种能产生新型氨基酸的微生物，其丰富的赖氨酸（1.19g/100g）和硒（0.54ppm/100g）可能与吡咯赖氨酸和L-硒代半胱氨酸或L-硒-甲基硒代半胱氨酸的生物合成存在着密切的关系，有望在抑制肿瘤、抗氧化、辅助治疗心血管疾病、解毒排毒等方面进行开发。

近年我国对不同植物中的黄芪苷进行了各方面的研究，相继报道了黄芪苷有免疫调节、抗炎，降压，镇静镇痛，保肝护心，清除多种自由基等多方面的药理作用。关于黄芪中黄芪苷的提取及含量测定早有报道，但对产于山西浑源县北芪菇中黄芪苷的含量少有报道，如今北芪菇中黄芪苷的研究备受人们重视，有关黄芪苷的研究变成了科学界的热点。随着社会经济和科学技术的发展，黄芪苷的开发研究和应用范围会更广，开发前景会更好，从而促进医疗事业的发展。

北芪菇中的黄芪苷以黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅲ、黄芪甲苷为主。黄芪皂苷在抗氧化、调节免疫功能、保肝、抗病毒和对心脑血管等多方面具有显著作用。有关黄芪皂苷的鉴别通常采用相继报道了水浸提法，碱水提取法，回流法、CO₂超临界流体萃取法等多种方法。黄芪皂苷的含量测定曾尝试采用高效液相一紫外检测器检测，但由于黄芪皂苷在紫外区仅有微弱的吸收，溶剂噪音对结果有较大影响，灵敏度低，测定误差大。

黄芪甲苷为环阿尔廷型三萜皂苷类化合物，生物活性高，是黄芪的主要药理成份，是黄芪及含黄芪制剂的重要鉴定指标。黄芪甲苷对人体拥有非常高的药理作用，其在器官保护（尤其是肝脏、肺、心肌、肾脏、脑等器官）、免疫调节、抗细胞凋亡、抗炎抗病毒、抗糖尿病、清除自由基、抗衰老等方面具有广泛的药理作用。黄芪甲苷的常见提取方法主要有水浸提法，碱水提取法，醇提法、煎煮法、超声辅助提取法、微波辅助提取法、索式提取法、超临界CO₂萃取法及加速溶剂萃取法，黄芪甲苷含量测定方法主要有分光光度法、高效液相色谱法、荧光、紫外分光光度法等。但是上述方法操作步骤繁琐，测定时间长，例如索氏回流提取需要碱洗及大孔树脂富集过程，洗脱富集复杂，不易操作，同时含量测定过程中由于黄芪甲苷仅在近紫外区（200nm左右）有微弱吸收，属于末端吸收，因为波长越长，噪音就越大，灵敏度也随之降低。

在大多数化学实验室，薄层色谱（TLC）是一种常用、可靠的方法，但传统的可见技术不提供薄层色谱斑点的结构信息。质谱法是一种鉴定这些斑点的强大技术，然而传统的从薄层板上手动刮点、萃取、重组，进而在质谱上注射分析获取质谱图的过程耗时耗力。