[发明专利]一种高通量玉米叶片DNA提取的方法

说明书

本发明涉及DNA的提取方法，具体公开了一种高通量玉米叶片DNA提取的方法。所述方法为将玉米叶片加入预处理液，研磨；吸出预处理液弃去，加入DNA提取液；混匀后水浴提取，将提取液离心，取上清液，加入异丙醇沉淀DNA，混匀，离心，弃去上清；加入酒精洗沉淀DNA，混匀，离心，弃去上清，即得。本发明所述方法无需使用液氮进行样本处理，且无需使用氯仿等有机溶剂，相对安全无毒；本发明通过加入预处理液，有效防止了玉米叶片在研磨过程中的氧化，并在预处理液和提取液中均加入了一定比例的聚乙烯吡咯烷酮(PVP)，可以去除酚类等杂质，确保所提DNA质量；所述方法可高度匹配移液工作站，实现高通量自动化。

技术领域

本发明涉及DNA的提取方法，具体地说，涉及一种高通量玉米叶片DNA提取的方法。

背景技术

利用CTAB等方法提取的玉米叶片DNA可以满足KASP基因型分型的要求，Arraytape上均能得到较好的结果。但这种方法耗时长，通量低，并且用到大量氯仿等有毒有机溶液，仅适用于测序或基因芯片等对于DNA质量要求高的实验，对于大规模高通量叶片DNA提取如基因鉴定，纯系材料少量标记分型等则非常不适宜。因此开发不使用有毒有机试剂的快速提取玉米叶片DNA的方法是非常必要的。

通过张友昌提出的“一种棉花叶片DNA快速提取方法”(《棉花学报》，2016年04期)，我们知道利用TE缓冲液加KCl进行沸水浴可以提取棉花叶片DNA，该DNA可以满足普通PCR实验的要求。然而，依然需要开发一种可以进行高通量玉米叶片DNA提取的方法，使得所提取的DNA不仅可以满足普通PCR反应，而且可以满足KASP基因分型及微量PCR体系(≤5μL)反应的要求。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种高通量玉米叶片DNA提取的方法。

为了实现本发明目的，本发明的技术方案如下：

本发明提供一种高通量玉米叶片DNA提取的方法，包括：

将玉米叶片加入预处理液，研磨；

吸出预处理液弃去，加入DNA提取液；

混匀后水浴提取，将提取液离心，取上清液，加入异丙醇沉淀DNA，混匀，离心，弃去上清；

加入75％酒精洗沉淀DNA，混匀，离心，弃去上清，即得。

其中，所述预处理液和所述DNA提取液含有0-4％m/v PVP，优选含有2％m/v PVP。

更为优选，所述预处理液和所述预DNA提取液采用如下配比：