[发明专利]一种胶体金免疫层析试纸及其制备方法与应用

说明书

本申请公开了一种胶体金免疫层析试纸及其制备方法与应用，所述试纸包括胶体金标记的牛蓝舌病毒vp7蛋白、检测线和质控线。所述试纸适用于检测蓝舌病毒抗体，制备过程经过多种条件的优化，在牛源蓝舌病标准阳性血清稀释至64倍时仍可检测，且与牛结核、牛蓝舌病、牛病毒性腹泻、牛巴氏杆菌病、牛地方流行性白血病阳性血清均无交叉反应；与国外商品化试剂盒ELISA检测试剂盒(IDEXX)相比的符合率为98％。所述试纸还具有较好的稳定性，整个检测过程可在10min内完成，能够快速检测样品血清，适用于现场快速检测。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体说是一种检测蓝舌病毒抗体的胶体金免疫层析试纸及其制备方法与应用。

背景技术

蓝舌病(bluetongue，BT)是由蓝舌病病毒(bluetongue virus，BTV)引起的一种重要虫媒传染病，主要侵害绵羊或牛及部分鹿种群，发病动物的舌、齿龈和颊粘膜会出现充血肿胀、形成瘀点，此后变为青紫色，并引起较高的发病率和致死率。BTV最早于1876年被发现，目前在热带和温带的多个国家都已分离到BTV，并且该病的分布范围在不断的扩大，已成为国际性广泛流行扩散的动物疫病，呈现全球性分布的趋势。据世界动物卫生组织(OIE)统计，全球动物存在被蓝舌病病毒感染并确认的国家众多，包括与我国存在动物国际贸易的国家。我国于1979年第一次发现该病的存在，目前在我国29个省份已检测到感染BTV阳性的病畜。目前，OIE已将BT列为法定通报性疾病，我国也将其列为一类动物疫病，因此建立快速检测牛源蓝舌病诊断方法具有非常重要的公共卫生学意义。

胶体金免疫层析技术自被研制开发以来，就以其使用方便性、检测迅速性、特异性强等特点，成为快速检测传染病、药物残留、早孕等的首选。胶体金标记由于标记物的制备简便，方法敏感、特异，不需要使用放射性同位素，或有潜在致癌物质的酶显色底物，也不要荧光显微镜，它的应用范围广，应用于各种液相免疫测定和固相免疫分析以及流式细胞术等。

目前，在动物疾病诊断中，对于检测蓝舌病毒抗体的胶体金免疫层析试纸条报道较少。我国每年进口十几万头种牛，在进境牛疫病的检疫中，如何快速准确地检测蓝舌病毒抗体，是口岸检测实际工作中急需解决的问题。

抗体检测是蓝舌病诊断的重要依据。采用抗体检测，可以诊断发病早期的病例(毒血症出现以前)。通过比较发病和健康动物血清抗体水平平均差异，结合临床症状、流行病学进行初步诊断，此外对同群动物进行不同时间的抗体监测，依据抗体变化的幅度可对疫病情况做出初步诊断。另外，免疫抗体检测结果，是最主要疫情预警信息之一，通过建立抗体监测数据库和纵横比较，为动物重大疫情预警、预报充分发挥作用。同时，抗体监测可对疫情风险及时做出科学的评估，为防控重大动物疫病提供科学数据。

发明内容

针对现有技术中存在的缺陷，本发明的目的在于提供一种胶体金免疫层析试纸及其制备方法与应用。所述试纸适用于检测蓝舌病毒抗体，制备过程经过多种条件的优化，能在10min内完成样品检测，具有灵敏度高、特异性强、稳定性好、易携带、使用方便等优点。

为达到以上目的，本发明采取的技术方案是：

一种胶体金免疫层析试纸，包括胶体金标记的牛蓝舌病毒vp7蛋白、检测线和质控线。

由于蓝舌病毒Vp7是一种内衣壳结构蛋白，VP7基因的高度保守性决定了它是建立BTV群特异性抗原抗体检测方法的最佳选择。因此本申请利用胶体金免疫层析技术检测牛血清中的蓝舌病毒抗体，研制一种快速灵敏的胶体金试纸条方法，为口岸一线进境牛的蓝舌病检测及监测工作提供快速筛查的技术储备。

优选地，所述牛蓝舌病毒vp7蛋白的序列为SEQ ID No.2所示序列或在SEQ IDNo.2所示序列的末端(N端和/或C端)添加标签序列后的序列，以便于蛋白的分离纯化，优选的，所述标签为His标签、GST标签。

进一步地，所述胶体金标记的牛蓝舌病毒vp7蛋白中，胶体金的粒径为10—50nm，优选20nm。