[发明专利]用于靶向HBB RNA的gRNA及基于C2c2的HBB突变检测方法、检测试剂盒在审
| 申请号： | 201811255807.4 | 申请日： | 2018-10-16 |
| 公开（公告）号： | CN109913452A | 公开（公告）日： | 2019-06-21 |
| 发明（设计）人： | 陈翀;罗镇华 | 申请（专利权）人： | 广州普世利华科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/90;C12N15/85;C12N15/10;C12Q1/6827 |
| 代理公司： | 广州市南锋专利事务所有限公司 44228 | 代理人： | 张小黎 |
| 地址： | 510000 广东省广州市海珠区*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 检测试剂 突变检测 靶标 人β珠蛋白基因 基因转录产物 复合物检测 可检测信号 特异性靶向 准确度 靶向识别 规律间隔 检测标记 商业应用 系统应用 重复序列 复合物 灵敏度 检测 靶向 成簇 切割 释放 基因 | ||
1.一种特异性识别靶核苷酸的gRNA序列，所述的靶核苷酸为β珠蛋白(HBB)基因和/或HBB疾病相关基因对应的RNA序列，其特征在于，所述gRNA对应的编码DNA序列包括表2中SEQID NO.21-SEQ ID NO.140所示核苷酸序列中的一条或多条。
2.一种CRISPR-C2c2系统，其特征在于，包括：
1)C2c2效应蛋白；
2)一种或多种核酸，其中，所述一种或多种核酸包含至少一种如权利要求1所述的gRNA序列；
所述C2c2蛋白与gRNA结合形成CRISPR-C2c2复合物，并且当所述CRISPR-C2c2复合物与权利要求1所述的靶核苷酸结合时，所述CRISPR-C2c2复合物对所述靶核苷酸和/或与靶核苷酸相关的序列进行修饰。
3.一种非天然存在的或工程化的组合物，其特征在于，所述组合物包含一个或多个载体，该一个或多个载体包含组分I和组分II：
所述组分I包括第一调节元件，以及与所述第一调节元件可操作地连接的编码C2c2蛋白的编码序列；所述组分II包括第二调节元件，以及与所述第二调节元件可操作地连接的编码gRNA的编码序列，其中，所述gRNA包含如权利要求1所述的gRNA序列；
其中，组分I和II位于相同或不同载体上；
所述C2c2蛋白与gRNA结合形成CRISPR-C2c2复合物，并且当所述CRISPR-C2c2复合物与权利要求1所述的靶核苷酸结合时，所述CRISPR-C2c2复合物对所述靶核苷酸和/或与靶核苷酸相关的序列进行修饰。
4.一种修饰与权利要求1所述的靶核苷酸相关的序列的方法，其特征在于，所述方法包括递送包含1)及2)的组合物，使包含1)及2)的组合物与所述靶核苷酸及所述与靶核苷酸相关的序列接近：
1)C2c2效应蛋白；
2)一种或多种核酸，其中，所述一种或多种核酸包含至少一种如权利要求1所述的gRNA序列；
所述C2c2蛋白与gRNA结合形成CRISPR-C2c2复合物，并且当所述CRISPR-C2c2复合物与权利要求1所述的靶核苷酸结合时，所述CRISPR-C2c2复合物对所述靶核苷酸和/或与靶核苷酸相关的序列进行修饰。
5.一种真核宿主细胞，其特征在于，包含组分I和/或组分II：
所述组分I包括第一调节元件，以及与所述第一调节元件可操作地连接的编码C2c2蛋白的编码序列；所述组分II包括第二调节元件，以及与所述第二调节元件可操作地连接的编码gRNA的编码序列，其中，所述gRNA包含权利要求1所述的gRNA序列；
其中，组分I和II位于相同或不同载体上；
所述C2c2蛋白与gRNA结合形成CRISPR-C2c2复合物，并且当所述CRISPR-C2c2复合物与权利要求1所述的靶核苷酸结合时，所述CRISPR-C2c2复合物对所述靶核苷酸和/或与靶核苷酸相关的序列进行修饰。
6.如权利要求2-5中的任一项，其特征在于，所述的修饰是引入断裂、切割或标记。
7.一种试剂盒，其特征在于，包括权利要求1提供的gRNA序列、权利要求2提供的CRISPR-C2c2系统、权利要求3提供的非天然存在的或工程化的组合物、权利要求5提供的真核宿主细胞中的一种或多种。
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