[发明专利]狐亚科激活素A蛋白及其制备与应用

说明书

本发明涉及分子生物学领域，具体而言，涉及一种狐亚科激活素A蛋白及其制备与应用。所述的激活素A蛋白由两个狐亚科激活素βA亚基组成，从狐亚科动物中分离得到其基因序列后利用分子生物学及细胞生物学的方法纯化出具有生物活性的蛋白。激活素A蛋白在狐亚科动物中的研究还比较少，本发明分离得到了其基因序列，并提高了其高纯度蛋白的表达方法，可为相关研究提供研究基础和新的思路，大大增加了激活素A蛋白的研究与应用前景。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体而言，涉及一种狐亚科激活素A蛋白及其制备与应用。

背景技术

激活素(Actvin,ACT)，又名活化素，是Vale等和Ling等首先从猪卵泡液中分离纯化出来的一种糖蛋白激素，因能与抑制素(Inhibin,INH)分别特异性促进和抑制垂体细胞分泌卵泡刺激素(Follicle StimulatingHormone，FSH)而得名，属于转化生长因子β超家族成员。激活素主要是由卵巢颗粒细胞和胎盘合成分泌，由于其具有特异性地促进垂体细胞分泌及合成卵泡刺激素的生物学活性，因而被命名为激活素。

ACT同INH均为两个亚基构成的二聚体。ACT由β亚单位构成，包括同源二聚体ACTA(βA-βA)和ACTB(βB-βB)或异源二聚体ACTAB(βA-βB)。其中βA亚基含量最多。三种分子结构的激活素具有类似的生物学活性，其作用的特异性与其受体后信号传导的组织差异有关。因ACTA的生理作用更为广泛，对机体整个生命过程均有重要的作用，成为近年来备受关注的新型细胞因子，故目前对ACTA的研究较多。

狐狸(Vulpes vulpes)属于中型的杂食性哺乳动物，属于犬科。它作为重要的毛皮动物被大量饲养。目前国内外关于狐狸卵母细胞的体外成熟的研究并不顺利，主要原因是狐狸卵母细胞成熟过程中调节因子的种类及机制知之甚少。众所周知ACTA在哺乳动物卵母细胞成熟过程中发挥了重要作用。但ACTA是否有助于狐狸卵母细胞的体外成熟的研究一直没有被进行，主要是因为目前国内对狐亚科ACTA的研究还较少，尚无狐亚科ACTA蛋白质与cDNA序列的报道，这为进一步探讨研究狐亚科ACTA的功能、其表达的时空特异性、相关信号通路及对狐亚科繁殖力等的研究都将造成了障碍。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新颖的激活素A蛋白，并对其制备方法与功能进行了研究。

所述的激活素A蛋白由两个狐亚科激活素βA亚基(氨基酸序列如SEQID NO:1所示)组成，从狐亚科动物中分离得到。

激活素A蛋白在狐亚科动物中的研究还比较少，本发明分离得到了其基因序列，并提高了其高纯度蛋白的表达方法，可为相关研究提供研究基础和新的思路，大大增加了激活素A蛋白的研究与应用前景。

附图说明

为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明一个实施例中北极狐INHBA基因扩增结果；M.DNA相对分子质量标准(DL2000)；1.INHBA基因扩增产物；2.阴性对照；

图2为本发明一个实施例中pcDNA4/INHBA-Fox质粒的酶切鉴定结果；M1.DNA相对分子质量标准(DL10000)；1.INHBA基因扩增产物；2.BamHI单酶切pcDNA4/myc-His空质粒；3.BamHI单酶切pcDNA4/INHBA-Fox重组质粒；4.BamHI和EcoRI双酶切pcDNA4/INHBA-Fox重组质粒；M2.DNA相对分子质量标准(DL2000)；