[发明专利]一种高效去除猪未成熟卵母细胞周围卵丘细胞的方法

权利要求书

1.一种高效去除猪未成熟卵母细胞周围卵丘细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)溶液的配制：:配制以氯化钠作为溶质，TCM199作为溶剂配制成含有1wt％Nacl的液体；配制液体前后分别测量液体的渗透压，再将所配制的液体进行过滤，分装到1.5mL离心管中，加热至38.5℃备用；

(2)卵丘卵母细胞复合体去除外围卵丘细胞：将卵泡液中的卵丘卵母细胞挑到盛有洗卵液的培养皿中；利用口吸管针将上述挑选出的卵丘卵母细胞移入到提前预热好盛有400μL 1wt％Nacl液体的1.5mL离心管中，将含有卵丘卵母细胞的离心管置于涡旋振荡器中涡旋振荡5分钟，用离心机将离心管进行瞬时离心，然后将涡旋震荡后带有卵母细胞的液体转移到培养皿中；借助口吸管针将除去卵丘颗粒细胞的卵母细胞转移至TCM199操作液中，且快速清洗3遍，并置于盛有TCM199液滴中恢复5分钟，从而完成去除未成熟卵母细胞周围卵丘细胞的收集。

2.根据权利要求1所述的高效去除猪未成熟卵母细胞周围卵丘细胞的方法，其特征在于，步骤(1)中，配制液体之前测量TCM199的渗透压值为300osm，配制之后的液体渗透压值为600osm。

3.根据权利要求1所述的高效去除猪未成熟卵母细胞周围卵丘细胞的方法，其特征在于，步骤(2)中，洗卵液的制备方法为：用100mL去离子水溶解1g PVA，待PVA完全溶解，冷却后再取9.55g DPBS粉末，加去离子水，使溶解，定容至1L，高压前盖锡箔纸，高压结束后冷却，以1mL/L的比例加酚红和双抗,在超净台内，使用0.22μm滤器过滤，除菌后分装至50mL离心管中，4℃保存。