[发明专利]一种针对产苯唑西林酶OXA-48细菌的特异性检测方法有效
申请号: | 201811259265.8 | 申请日: | 2018-10-26 |
公开(公告)号: | CN109324082B | 公开(公告)日: | 2020-05-12 |
发明(设计)人: | 和媛;张烨 | 申请(专利权)人: | 西北大学 |
主分类号: | G01N25/20 | 分类号: | G01N25/20 |
代理公司: | 北京冠和权律师事务所 11399 | 代理人: | 朱健;陈国军 |
地址: | 710000 *** | 国省代码: | 陕西;61 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 针对 产苯唑 西林 oxa 48 细菌 特异性 检测 方法 | ||
1.一种针对产苯唑西林酶OXA-48细菌的特异性检测方法,其特征在于:所述检测方法包括下述步骤:
(1)将待测细菌样品用包含100mM磷酸、20-320mM氯离子,pH为7.5的缓冲液配制成浓度为OD600=4-20的细菌悬液,然后将该细菌悬液加入等温滴定微量热仪样品池中;
(2)向滴定针中加入由上述相同缓冲液溶解配制的碳青霉烯类抗生素溶液;
(3)将滴定针中的碳青霉烯类抗生素溶液加入等温滴定微量热仪样品池,检测温度为37℃,抗生素终浓度为20-800μM,记录样品池中实时热量变化,直至热量变化回到基线,即所有碳青霉烯类抗生素被水解完全,得到实时热谱曲线;
(4)根据所得到的实时热谱曲线是否具有“双相热谱曲线”特征,判断待测细菌样品是否携带OXA-48酶的信息。
2.如权利要求1所述的检测方法,其特征在于第(1)步骤中所述缓冲液中包含的氯离子浓度为100mM。
3.如权利要求1所述的检测方法,其特征在于第(1)步骤中所述细菌悬液的浓度为OD600=8。
4.如权利要求1所述的检测方法,其中所述待测细菌样品为革兰氏阴性细菌或革兰氏阳性细菌。
5.如权利要求1所述的检测方法,其中所述碳青霉烯类抗生素为亚胺培南、美罗培南、厄他培南、比阿培南、多尼培南、帕尼培南中的至少一种。
6.如权利要求1所述的检测方法,其中第(3)步骤中滴定完成时碳青霉烯类抗生素的终浓度为690-720μM。
7.如权利要求6所述的检测方法,其中第(3)步骤中滴定完成时碳青霉烯类抗生素的终浓度为700μM。
8.如权利要求1-7任一项所述的检测方法在制备细菌耐药性检测试剂盒中的应用。
9.如权利要求1-7任一项所述的检测方法在制备体外耐药细菌筛选系统中的应用。
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