[发明专利]一种从金枪鱼眼部制备高生物活性磷脂的方法

权利要求书

1.一种从金枪鱼眼部制备高生物活性磷脂的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

(1)以金枪鱼眼部为原料，去除鱼骨，加入95％碱性乙醇溶液，在温度为4℃的条件下匀浆15-20min，获得金枪鱼眼部混合液；

(2)在超声波作用下，搅拌所述金枪鱼眼部混合液，并从中萃取含有磷脂的脂质，在萃取期间，每隔30min间歇性以超声波辅助萃取，获得含有磷脂的脂质混合液；

(3)在萃取结束后，分别用三层纱布和三层滤纸过滤所述含有磷脂的脂质混合液，取滤液于40-45℃的温度下减压蒸馏以收集脂质部分，乙醇回收重复利用；

(4)取所述脂质部分，在30-45℃的温度下，低流速滴加0.9％NaCl溶液，边滴加边搅拌，在滴加结束后继续搅拌直至出现絮状沉淀，在温度为4℃的条件下12,000×g离心15-20min，取沉淀物即为粗磷脂；

(5)将所述粗磷脂溶解于二氯甲烷中，用硅胶柱层析法进行分离，其中硅胶需用3倍甲醇清洗30min，干燥后于110℃下活化2h、洗脱获得含有磷脂的洗脱液；

(6)收集所述含有磷脂的洗脱液，在温度为40-45℃的条件下减压蒸馏获得纯度较高的磷脂。

2.根据权利要求1所述的一种从金枪鱼眼部制备高生物活性磷脂的方法，其特征在于：步骤(1)中所述原料为从金枪鱼鱼眼中心至金枪鱼鱼眼直径的10-15倍部分，所述原料重量与95％碱性乙醇溶液体积之比为1:5-1:10。

3.根据权利要求1所述的一种从金枪鱼眼部制备高生物活性磷脂的方法，其特征在于：步骤(1)中所述95％碱性乙醇溶液为向95％乙醇中加入NaOH，使其pH值在10.0-11.0之间。

4.根据权利要求1所述的一种从金枪鱼眼部制备高生物活性磷脂的方法，其特征在于：步骤(2)中所述萃取时间为2-5h，萃取温度为40-60℃。

5.根据权利要求1所述的一种从金枪鱼眼部制备高生物活性磷脂的方法，其特征在于：步骤(2)中所述超声波处理时间为5-10min，超声声场强度为60-100W/cm²，超声频率为25kHz。

6.根据权利要求1所述的一种从金枪鱼眼部制备高生物活性磷脂的方法，其特征在于：步骤(4)中所述边滴加边搅拌的搅拌速度为30-80r/min，滴加速度为0.2-0.6mL/min。

7.根据权利要求1所述的一种从金枪鱼眼部制备高生物活性磷脂的方法，其特征在于：步骤(4)中所述0.9％NaCl溶液用量为所述脂质部分重量的2％-5％。

8.根据权利要求1所述的一种从金枪鱼眼部制备高生物活性磷脂的方法，其特征在于，步骤(5)中所述洗脱具体为：先用一位柱体积的环已烷洗脱以除去小分子极性杂质，再用环已烷和甲醇的混合液洗脱，所述环已烷和甲醇的体积比为2:3，所述洗脱速度为7ml/min，每10mL收集洗脱液，用薄层色谱法检测洗脱液中的磷脂。

9.根据权利要求8所述的一种从金枪鱼眼部制备高生物活性磷脂的方法，其特征在于：所述薄层色谱法的展开剂为A展开剂和B展开剂，先用所述A展开剂展开至2/3，再用所述B展开剂展开。

10.根据权利要求9所述的一种从金枪鱼眼部制备高生物活性磷脂的方法，其特征在于：所述A展开剂由氯仿、甲醇和氨水组成，所述氯仿、甲醇、氨水的体积比为65:30:5，所述B展开剂由氯仿、甲醇、冰醋酸和蒸馏水组成，所述氯仿、甲醇、冰醋酸和蒸馏水的体积比为170:25:25:6，再用碘蒸汽显色法检测磷脂。