[发明专利]一种以凡士林柱为支撑的胚胎立体结构的荧光成像方法

权利要求书

1.一种以凡士林柱为支撑的胚胎立体结构的荧光成像方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)胚胎准备；

(2)DAPI染核；

(3)制备凡士林柱支撑柱及添加抗淬灭剂：首先，用凡士林在载玻片一侧方形区域的四角点四个柱，且四个凡士林柱所围成的面积要小于盖玻片的面积，所点的凡士林柱的高度为2㎜；然后，在四个凡士林柱围成区域内的正中央滴加15μL抗淬灭剂；

(4)压片、封片；

(5)激光共聚焦显微镜扫描成像；将制备凡士林柱为支撑的载玻片分别在激光共聚焦显微镜的普通光和紫外光激发下观察猪第七天囊胚的立体结构。

2.根据权利要求1所述的以凡士林柱为支撑的胚胎立体结构的荧光成像方法，其特征在于，步骤(1)中，胚胎准备具体步骤如下：

①收集胚胎：本发明以猪第七天囊胚为实验对象，将第七天囊胚放入DPBS+0.3wt％PVP液滴快洗三遍；

②再将第七天囊胚移入4％PFA液滴中室温条件下固定15-20分钟；

③四孔板的孔中加入DPBS+0.3wt％PVP液体，每孔加400μL；

④固定好后的第七天囊胚移入四孔板中，将四孔板放在摇床上摇晃进行清洗三次，每次5分钟。

3.根据权利要求1所述的以凡士林柱为支撑的胚胎立体结构的荧光成像方法，其特征在于，步骤(2)中，DAPI染核具体步骤如下：

从离心管中取出浓度为1μg/mL的DAPI 50μL，再取1μL DAPI，吹打混匀，滴加在皿盖上；将第七天囊胚移入DAPI液滴中室温孵育10分钟，避光；孵育结束后，往四孔板的孔中加入400μLDPBS+0.3wt％PVP清洗三次，每次5分钟。

4.根据权利要求1所述的以凡士林柱为支撑的胚胎立体结构的荧光成像方法，其特征在于，步骤(4)中，压片、封片具体步骤如下：

将第七天囊胚移入抗淬灭剂中进行压片，保证盖玻片与抗淬灭剂接触后使抗淬灭剂向四周扩散即可，随后用指甲油进行封片。