[发明专利]有核红细胞模拟粒子及其制备方法与应用

说明书

有核红细胞模拟粒子及其制备方法与应用，属于医学检测技术领域。解决了如何提供一种工艺简单、产率高、产物稳定性好的有核红细胞模拟粒子的制备方法的问题。本发明的制备方法：先分离并洗涤红细胞，得到纯化红细胞；然后用稀释液稀释纯化红细胞，加入加载剂，在脉冲电磁场的作用下将加载剂引入到纯化红细胞内；再向引入加载剂后的细胞中加入细胞固定液，18‑28℃固定，洗涤细胞，用细胞保存液保存，得到有核红细胞模拟粒子。该制备步骤简单，所用试剂成分较单一，制得的产物产率较高，适合大量的生产。

技术领域

本发明属于医学检测技术领域，具体涉及一种有核红细胞模拟粒子及其制备方法与应用。

背景技术

正常的人的成熟红细胞不含有细胞核，主要成分是蛋白质和铁，具备运输氧的能力，有核红细胞属于红细胞发育过程中的初始幼稚状态，一般存在于骨髓中，但一些病理情况下，外周血内也会出现有核红细胞(NRBC)，对人体血液中有核红细胞的检测，可以为一些疾病的诊断提供依据。

其临床意义如下：

1、增生性贫血：最常见于各种贫血，急性失血性贫血、巨幼红细胞性贫血、严重的低色素性贫血；以出现晚幼红细胞或中幼红细胞为多见；外周血中出现有核红细胞表示骨髓中红细胞系增生明显活跃；

2、红血病、红白血病：骨髓中幼稚红细胞异常增生并释放入血，以原红细胞、早幼红细胞为多见；

3、髓外造血：骨髓纤维化时，脾、肝、淋巴结等组织恢复胚胎时期的造血功能，这些组织因缺乏对血细胞释放的调控能力，幼稚血细胞大量进入外周血；各发育阶段的幼红细胞都可见到，并可见到幼稚粒细胞及巨核细胞；

4、其他：如骨髓转移癌、严重缺氧等。

目前，越来越多的血细胞分析仪具有检测有核红细胞的功能，为了保证测值的准确性，需对其进行质量控制，即使用含有有核红细胞模拟粒子的质控品进行检测。

美国专利US5559037(Kim等人)公开了一种用于有核红细胞和白细胞的流式细胞计数分析的方法。该方法使用了荧光、低角度光散射和轴光损失测量法，以便从白色血样中分辨出NRBC。美国专利US5879900(Kim等人)进一步地公开了一种辨别NRBC、白细胞和受损白细胞的方法，以及通过流式细胞仪提供血液样品中的白细胞差别的方法，这种方法的缺点是准确性不高。

美国专利US7176031和US6962817公开了使用人工合成粒子模拟人有核红细胞的方法。这种方法的缺陷在于合成粒子的生产工艺复杂，成本较高。美国专利US7354767公开了使用普通哺乳动物红细胞(不含细胞核)制备有核红细胞模拟粒子的方法。这种方法制备的模拟粒子与人有核红细胞的细胞核大小接近，适用于采用阻抗法检测有核红细胞的血液细胞分析仪。但这种模拟粒子不含细胞核，不适于模拟人有核红细胞被特定荧光染料染色后的荧光特性。美国专利US7195919公开的技术方案通过在红细胞表面连接生物大分子(如：核酸、肤链等)，使其能够模拟人有核红细胞的荧光特性。这种方法的不足之处在于工艺复杂，且作为原料的生物大分子成本较高。