[发明专利]CT/荧光双模态成像荷载siRNA的纳米粒及制备方法和应用

权利要求书

1.一种CT/荧光双模态成像荷载siRNA的纳米粒，其特征在于，该纳米粒包括载体成分、药物成分、CT成像成分和刺激响应性荧光成像成分，所述载体成分为具有微正电特性的阳离子脂质1,2-二羟基-3-二甲基氨基丙烷DlinDMA、PEG修饰的脂质聚乙二醇二甲基丙烯酸酯PEG-C-DMA、二硬脂酸磷脂酰胆碱DSPC及胆固醇Cholesterol，其摩尔比为30-40∶5-10∶5-10∶30-40；药物成分为抑制Survivin基因表达的siRNA；CT成像成分为金纳米颗粒；刺激响应性荧光成像成分为碳氰类近红外染料Cy5；碳氰类近红外染料Cy5通过化学修饰位于siRNA反义链的3’端，而正义链的5’端修饰有巯基，siRNA通过正义链5’端的巯基与CT成像成分纳米金相连；然后包裹上载体成分构成所述的纳米粒；其中：载体成分、药物成分、CT成像成分和刺激响应性荧光成像成分的摩尔比为1∶7-8∶210-240∶7-8。

2.一种权利要求 1 所述的CT/荧光双模态成像荷载siRNA的纳米粒的制备方法，其特征在于，该方法包括以下具体步骤：

步骤1：配制溶液

1）Au-siRNA-Cy5水相溶液

ⅰ）制备金纳米颗粒

将氯金酸溶液加入水中，磁力搅拌后，加入柠檬酸钠溶液，搅拌，逐滴加入新配置的预冷硼氢化钠，此时溶液逐渐变为酒红色，继续搅拌即得金纳米颗粒，加入焦碳酸二乙酯（DEPC）搅拌过夜后高温高压灭菌除去可降解siRNA的核酶，得到纯化金纳米颗粒；制备过程中，氯金酸、柠檬酸钠、硼氢化钠的摩尔比为1∶7∶0.4；

ⅱ）将siRNA-Cy5与纯化纳米金相连

siRNA-Cy5正义链加5%-10%体积的100nM浓度的三（2- 羧乙基）膦盐酸盐激活1h-3h，加入与siRNA-Cy5正义链等摩尔量的已被DEPC水溶解了的siRNA-Cy5反义链，75℃-90℃水浴10至30min，室温冷却后加入30倍摩尔量的纯化金纳米颗粒，1%-2%体积的饱和氯化钠溶液，每超声一段时间后加入1%-2%体积的饱和氯化钠溶液，共超声12h至36h；加20%-40%体积的异丙醇后高速离心；沉淀物即为金纳米颗粒与siRNA-Cy5的偶联物Au-siRNA-Cy5；

ⅲ）配制Au-siRNA-Cy5水相溶液

配制柠檬酸溶液、用氢氧化钠溶液调至pH=5，加入氯化钠溶解，混合后得水相溶液；

水相溶液中加入Au-siRNA-Cy5溶解，即得Au-siRNA-Cy5水相溶液；

2）脂类油相溶液

8-9体积的无水乙醇与1-2体积的超纯水混合摇匀得油相溶剂，脂类溶质为阳离子脂质1,2-二羟基-3-二甲基氨基丙烷DlinDMA、PEG修饰的脂质聚乙二醇二甲基丙烯酸酯PEG-C-DMA、二硬脂酸磷脂酰胆碱DSPC及胆固醇Cholesterol，将其按照摩尔比为1∶7-8∶210-240∶7-8溶解于所述油相溶剂中，即得脂类油相溶液；

步骤2：搭建制备装置

用两个T形三孔接头连接两个注射器和一个超滤离心管，构成制备装置；

步骤3：纳米粒制备

将搭建好的制备装置置于恒温条件下，两个注射器中分别吸入所述的水相溶液和油相溶液；两个注射器同时挤出，超滤离心管接收制备出的纳米粒，并经超滤离心管离心除去溶剂、稀释液及断裂的siRNA-Cy5；在超滤离心管内加入磷酸盐缓冲溶液获得纳米粒子溶液，过微孔滤膜除菌后保存。