[发明专利]表皮葡萄球菌在合成异丁酸中的应用

权利要求书

1.表皮葡萄球菌在合成异丁酸中的应用，其中所述的表皮葡萄球菌保藏于广东省微生物菌种保藏中心，其保藏号为GDMCC No：60458。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的表皮葡萄球菌的培养方法如下：

取健康人的粪便加入PBS溶液溶解并使得粪便在溶液中的浓度为10g/L，静置，取上清液2ml，加入100mlECY液体培养基，在37℃条件下密闭厌氧静止培养，观察到有明显的浑浊后转至ECY固体培养基中继续培养1天，挑取快速生长的菌落在所述ECY固体培养基上进行纯化，得到单菌落，即所述表皮葡萄球菌菌株；将得到的菌株保存在体积浓度为15％的甘油水溶液中，备用；其中，

所述的ECY固体培养基常温下每1000ml由以下原料组成：

水苏糖2.4-4.4g，胰酪胨5.8-7.8g，酵母粉3.2-5.2g，氯化钠3.7-5.3g，KH₂PO₄ 0.5-0.7g，MgSO₄·7H₂O 3.0-4.5g，无水乙醇3.8-4.0ml，琼脂粉15.3g-19.6g，其余为蒸馏水；

所述ECY固体培养基的pH值为6.1～7.5；

所述的ECY液体培养基每1000ml由以下原料组成：

水苏糖2.4-4.4g，胰酪胨5.8-7.8g，酵母粉3.2-5.2g，氯化钠3.7-5.3g，KH₂PO₄ 0.5-0.7g，MgSO₄·7H₂O 3.0-4.5g，无水乙醇3.8-4.0ml，其余为蒸馏水；

所述ECY液体培养基的pH值为7.2±0.1。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的异丁酸的合成方法如下：

吸取上述保存有表皮葡萄球菌菌株的甘油水溶液100微升和CFJ液体培养基10ml，在37℃条件下发酵培养8小时；然后，取1ml发酵培养液、0.5ml体积浓度为50％的H₂SO₄和2ml乙醚置于Eppendorf管内离心2min，取上清液移至另一只Eppendorf管内3000r/min 10min，取上清液，0.22μm的滤膜过滤，即得含异丁酸的上清液。

所述的CFJ液体培养基每1000ml由以下原料组成：

玉米粉10.5g，食用级红糖4.2g，氯化钠0.12g，氯化钙0.09g，硫酸镁0.008g，磷酸氢二钾0.04g，碳酸氢钙0.4g，其余为蒸馏水；

所述CFJ液体培养基的pH值为7.2±0.1。