[发明专利]一种HPV分型核酸检测血样标本处理方法

说明书

本发明公开了一种HPV分型核酸检测血样标本处理方法，属于体外检测技术领域，解决了含血样本在检测时会受到血细胞的影响，抑制HPVDNA的提取，导致结果假阴性的技术问题。本发明按照含红细胞的多少对宫颈脱落细胞样本进行分类，并加入脱落细胞保存液进行预处理，在保持宫颈脱落细胞形态和核酸完整的前提下，使红细胞充分悬浮及分散，洗去样本中的红细胞，样本的Globin的信号值大于150，保证实验成功率，避免假阴性结果的产生，提高了检测结果的准确性。

技术领域

本发明涉及体外检测技术领域，尤其涉及一种HPV分型核酸检测血样标本处理方法。

背景技术

宫颈癌位于我国女性恶性肿瘤发病和死亡率的第二位，每年有465000的新发癌患者。研究发现在90％左右宫颈癌患者中可检测到HPV，HPV是人乳头瘤病毒(humanpapilloma virus)，是导致宫颈癌的病原体，HPV分为27种亚型(6、11、16、18、26、31、33、35、39、40、42、43、44、45、51、52、53、55、56、58、59、61、66、68、81、82、83)，其中，HPV-16和HPV-18是高危型，易致阴道下段侵入性肿瘤，因此，开展HPV分型检测能很好的预防宫颈癌。

现有技术中，普遍采用流式荧光杂交技术检测27种HPV亚型，如果有任何HPV亚型探针的信号大于150，即可判断该探针对应的亚型阳性，否则为阴性。然而，当宫颈脱落细胞样本状态含有血时，这种含血样本在检测时会受到血细胞的影响，抑制HPV DNA的提取，导致结果假阴性，轻则实验失败，患者需重新采样，造成人员和试剂成本的浪费，增加患者采样的痛苦，重则造成结果的误判，延误患者最佳治疗时机。

发明内容

本发明针对上述技术问题，提供一种HPV分型核酸检测血样标本处理方法，减少红细胞对HPV分型检测结果的影响，提高实验的成功率和准确率。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种HPV分型核酸检测血样标本处理方法，包括以下步骤：

(1)采集宫颈脱落细胞，将宫颈脱落细胞样本进行分类：

红细胞数量小于0.01×10¹²个/每升的样本为A类样本；

红细胞数量在(0.01～0.1)×10¹²个/每升的样本为B类样本；

红细胞数量在(0.1～3)×10¹²个/每升的样本为C类样本；

红细胞数量大于3×10¹²个/每升的样本为D类样本；

(2)样本分类后，按照红细胞的多少加入脱落细胞保存液进行预处理，处理方法：

A类样本直接用于实验；

B类样本与脱落细胞保存液混匀后用于实验，所述B类样本与所述脱落细胞保存液的体积比为550～650:350～450；

C类样本与脱落细胞保存液混匀后用于实验，所述C类样本与所述脱落细胞保存液的体积比为350～450:550～650；

D类样本与脱落细胞保存液混匀后用于实验，所述D类样本与所述脱落细胞保存液的体积比为150～250:750～850。

优选地，红细胞的计数方法为：待测样本震荡混匀后用等渗稀释液稀释，滴入血细胞计数板，在显微镜下计数红细胞数量，换算得到样本中含有的红细胞数量。

优选地，所述的脱落细胞保存液为含异丙醇的醋酸盐缓冲液，pH值为5～6。

优选地，所述的脱落细胞保存液为上海透景生命科技有限公司生产的脱落细胞保存液。