[发明专利]一种蛋白质类脓毒症标志物及其在严重脓毒症早期预警的应用及其筛选方法

权利要求书

1.一种蛋白质类脓毒症标志物，其特征在于，包括：载脂蛋白CIII，β2微球蛋白。

2.一种蛋白质类脓毒症标志物在严重脓毒症早期预警的应用，其特征在于，

通过标志物的水平获得评价严重脓毒症的预警价值，若载脂蛋白CIII水平显著降低(P＝0.012)；β2微球蛋白水平显著升高(P＝0.000)；则具有严重脓毒症的预警作用；

标志物，包括：载脂蛋白CIII，β2微球蛋白。

3.根据权利要求2所述的一种蛋白质类脓毒症标志物在严重脓毒症早期预警的应用，其特征在于，评价严重脓毒症的预警价值的数值具体通过如下过程得到：

采集外周血，待血块凝固收缩后，离心，收集血清，分别检测载脂蛋白CIII、β2微球蛋白；

载脂蛋白CIII水平通过ELISA方法检测；

稀释后血清样本加入已包被的ELISA酶标板，孵育；

用清洗缓冲液洗板，拍干酶标板，分别加入稀释的生物素标记抗体，孵育；

用清洗缓冲液洗涤，加入稀释的辣根过氧化物酶标记亲和素，孵育后用清洗缓冲液洗涤；

各反应孔中加入新配制的TMB底物溶液，避光孵育；

各反应孔中加入终止液终止反应，在ELISA检测仪上检测各孔OD值，计算各样本载脂蛋白CIII蛋白的浓度；

血清样本在全自动免疫分析仪上通过免疫比浊法检测β2微球蛋白水平；

将两种蛋白水平带入Logistic逐步模型的回归方程，经计算后评价严重脓毒症的预警价值。

4.根据权利要求3所述的一种蛋白质类脓毒症标志物在严重脓毒症早期预警的应用，其特征在于，检测各样本蛋白浓度水平，带入Logistic逐步模型的回归方程，将载脂蛋白CIII和β2微球蛋白经计算后进入方程，用于评价是否为严重脓毒症；

所述Logistic逐步模型的回归方程为：

Logit(p)＝—0.08943—0.009521×(载脂蛋白CIII的蛋白浓度)+0.09736×(β2微球蛋白的浓度)

获得Logit(p)值，通过p＝exp[Logit(p)]/(1+exp[Logit(p)])换算得到p值，若p值大于等于0.5，即判定为严重脓毒症。

5.一种蛋白质类脓毒症标志物的筛选方法，其特征在于，包括如下过程：

一，筛选及验证血清蛋白的患者病例入组，

差异蛋白筛选阶段包括四组混合血清样本：非严重脓毒症组、严重脓毒症组，严重脓毒症患者确诊前样本、严重脓毒症患者确诊后样本；

二，差异蛋白验证阶段：非脓毒症组，脓毒症组，严重脓毒症组；

应用iTRAQ-2DLC-MS/MS技术筛选血清中差异蛋白质；

将保存的血清样本经高速离心、去除杂质、去除高丰度蛋白预处理后，经酶解的蛋白质片段用于iTRAQ标记，通过2DLC-MS/MS分析筛选出差异峰，得出各组蛋白表达水平；

比较四组混合血清样本，共搜索到293个蛋白质；根据iTRAQ报告离子强度比值计算蛋白表达的倍数变化，筛选出37个差异蛋白，其中19个蛋白上调(≥1.20倍)，18个蛋白下调(≤0.83倍)；

三，对iTRAQ-2DLC-MS/MS技术筛选的显著差异蛋白进行验证；

经鉴定3种蛋白在非严重脓毒症组与严重脓毒症组间具有显著性差异，分别是：与非严重脓毒症组相比，严重脓毒症组载脂蛋白CIII水平显著降低(P＝0.012)，β2微球蛋白(P＝0.000)、血管细胞黏附分子1(P＝0.006)显著升高；

经鉴定8种蛋白在非严重脓毒症组与严重脓毒症组间未见显著性差异，分别是：谷胱甘肽过氧化物酶3(P＝0.701)、α1抗胰蛋白酶(P＝0.837)、APOE(P＝0.451)、IgA(P＝0.211)、IgG(P＝0.565)、IgM(P＝0.117)、KAP(P＝0.464)、LAM(P＝0.876)。

6.根据权利要求5所述的一种蛋白质类脓毒症标志物的筛选方法，其特征在于，应用iTRAQ-2DLC-MS/MS技术筛选血清中差异蛋白质时，每组混合样本分别进行两种标记检测作为技术重复，结果取平均值。