[发明专利]一种蛋白质类脓毒症标志物及其在严重脓毒症早期预警的应用及其筛选方法

说明书

本发明公开了一种蛋白质类脓毒症标志物及其在严重脓毒症早期预警的应用及其筛选方法，通过iTRAQ‑2DLC‑MS/MS方法对严重脓毒症不同阶段的血清样本进行检测和分析，再应用ELISA方法验证差异蛋白，最终筛选并鉴定出2种特征性差异蛋白，分别是：载脂蛋白CIII，β2微球蛋白；再通过这两种标志物建立检测严重脓毒症患者早期预警的联合检测模型，利用该检测模型能够提高严重脓毒症的早期预警的敏感性和特异性，为预测脓毒症病情的进展的早期事件，为临床早期干预提供了参考依据，最终实现降低脓毒症死亡率。

技术领域

本发明涉及医药生物领域，特别是一种蛋白质类脓毒症标志物及其在严重脓毒症早期预警的应用及其筛选方法。

背景技术

脓毒症(sepsis)是由感染引起的全身炎症反应综合征(systemic inflammatoryresponse syndrome，SIRS)，是导致危重病患者死亡的主要原因。2012年全球脓毒症联盟公布的数据显示，因脓毒症而死亡的人数超过了前列腺癌、乳腺癌和艾滋病致死人数的总和，排美国死亡因素的前十位；并且在过去十年里，脓毒症发病率以每年8％至13％的速度剧增。更值得注意的是，一旦病情进展为严重脓毒症(severe sepsis)时，将导致器官功能障碍综合征和(或) 循环衰竭，严重影响患者预后。2007年，我国一项对十所大学附属医院的外科重症监护室的流行病学调查结果显示，严重脓毒症的发病率为8.68％(318/3665)，死亡率高达48.7％；患者每天的住院费用约为4016元，平均住院费用为91120元。因此，严重脓毒症不仅是患者死亡的高危因素，而且给个人和国家的带来了沉重的医疗负担。

近年来，虽已建立和统一了脓毒症临床诊断标准，并在病因、病理生理与治疗策略上都取得了一定的成果，但脓毒症的发病率和死亡率仍居高不下。我们分析其原因有以下几点：1) 脓毒症疾病本身的复杂性，虽然感染是脓毒症的重要诱因，但并不是所有的脓毒症患者能分离鉴定到病原菌，不能及时对脓毒症进行识别。2)严重脓毒症的诊断标准复杂，且多项指标需动态观察具有主观性，包括全身情况、血流动力学水平、组织灌注参数、实验室炎症指标及器官功能障碍参数等5大类20项标准。3)临床中缺乏早期干预的预警标志物。对于脓毒症病情进展规律尚未阐明，其变化并不依赖致病菌和毒素，而取决于机体的反应性，其反应机制一旦启动遵循自身规律发展，病情难以控制。近期研究结果显示，对脓毒症发展为更为严重的严重脓毒症、脓毒症休克进行早期识别，早期采取抗生素等措施，能显著降低脓毒症休克患者的死亡率。临床工作经验也提示，在严重脓毒症发病2小时内对疾病进行诊断，及时给与临床干预，患者生存率显著提高。因此，严重脓毒症的治疗重在及时，应用可靠的分子标志物进行筛查、简化流程、节省时间，从发热和具有全身炎症反应的患者中预警将会进展为严重脓毒症的患者，对其进行早期临床治疗，具有重要的临床价值。

目前，脓毒症及严重脓毒症的基础研究虽已深入到生物化学、细胞生理学及基因水平，但其诊断仍然主要依赖于临床症状和几个经典的实验室检测标志物。IL-6、IL-8及TNF-α参与严重脓毒症中病情发展，C反应蛋白是监测脓毒症的“经典”指标，但均缺乏特异性；越来越多的研究认为降钙素原(procalcitonin，PCT)是目前评价严重脓毒症严重程度及不良预后的最好指标，其敏感性和特异性均高于CRP、IL-6、IL-8及TNF-α。然而，临床应用中PCT 仍无法满足严重脓毒症的早期预警。最新的Meta分析结果也显示，与标准的抗生素治疗相比， PCT是进行短期持续的抗生素治疗的有效监测指标，但以PCT为指导的治疗最终对患者的死亡率没有改善。因此，PCT仍不是预测严重脓毒症病情的进展的早期事件，不能及时的预警严重脓毒症的发生，不能为临床早期干预提供参考依据，无法最终降低死亡率。临床中仍缺少有效的严重脓毒症早期预警的标志物。我们前期研究结果显示，肝素结合蛋白对急诊严重脓毒症/脓毒症休克患者的预警有一定的临床价值。然而，严重脓毒症患者作为复杂疾病，其标志物应为多个或一组蛋白质，而非单一蛋白质，临床研究中需要适当的方法进行机制研究。

发明内容