[发明专利]一种区分双孢蘑菇4个主栽品种的SSR-PCR鉴定方法有效

专利信息
申请号: 201811269851.0 申请日: 2018-10-29
公开(公告)号: CN109207625B 公开(公告)日: 2022-01-04
发明(设计)人: 蔡志欣;陈美元;廖剑华;郭仲杰;卢园萍;施肖堃;王泽生 申请(专利权)人: 福建省农业科学院食用菌研究所(福建省蘑菇菌种研究推广站)
主分类号: C12Q1/6895 分类号: C12Q1/6895;C12Q1/04;C12N15/11
代理公司: 福州元创专利商标代理有限公司 35100 代理人: 蔡学俊
地址: 350014 福建*** 国省代码: 福建;35
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摘要:
搜索关键词: 一种 区分 蘑菇 个主栽 品种 ssr pcr 鉴定 方法
【说明书】:

发明属于食用菌分子标记辅助育种领域,具体涉及一种区分双孢蘑菇4个主栽品种的SSR‑PCR鉴定方法。该方法利用SSR分子标记对双孢蘑菇国内主栽品种As2796、W192、福蘑38和A15进行PCR特异扩增,产生特异性图谱。本发明的方法不用冗杂的农艺性状出菇对比试验,特异性的扩增图谱能够鉴别区分双孢蘑菇国内的主栽品种,该方法耗时短,操作简便,特异性强,该方法可以在双孢蘑菇菌种生产中快速地鉴别国内的4个双孢蘑菇主栽品种,避免了同种异名和同名异种现象的发生,提高了双孢蘑菇的生产效率。

技术领域

本发明属于食用菌分子标记辅助育种领域,一种区分双孢蘑菇4个主栽品种As2796、W192、福蘑38和A15的SSR-PCR鉴定方法。

背景技术

简单序列重复(simple sequence repeat, SSR) ,又称微卫星DNA,是以2-6个碱基为重复基元的串联重复序列,广泛存在于高等生物的基因组中。在众多的分子标记方法中,基于基因组的SSR标记具有特异位点众多、共显性、复等位、分布广泛等特点,目前已成为构建连锁遗传图谱、研究群体遗传学、绘制品种指纹图谱、筛选个体特异谱带以及分子标记辅助育种等的理想工具。

双孢蘑菇(Agaricus bisporus)是世界上栽培最为广泛的食用菌, 具有非常重要的经济价值。在中国,双孢蘑菇也广泛种植,据2016年官方统计全国双孢蘑菇年产量338万吨,占世界总产量的60%以上,目前已成为农业中的新兴支撑产业。由于我国各地区的生产力发展不平衡,种植双孢蘑菇的生产方式也是呈现出多样化,有全套引进荷兰模式的全机械化的工厂化种植方式,也有经过改良的适合中国本土国情的国内机械化生产方式,还有数量众多的以个体农户为主的小生产作坊。目前,流通于国内的双孢蘑菇主栽品种有As2796、W192、福蘑38和A15,根据国家食用菌产业技术体系双孢蘑菇品种改良岗位调研结果,上述4个主栽品种使用比例占90%以上。其中As2796出菇潮次多,耐粗放管理,较适合小生产作坊种植;W192和福蘑38产量高,质量较好,出菇较集中,适合改良式的中国工厂化种植;A15产量高,质量中等,出菇集中,适合荷兰模式的全机械化的工厂化种植方式。由于不同的种植方式要求与之相适应的品种种性和栽培管理粗放性也不同,所以在双孢蘑菇生产过程中对菌种真实性的要求非常高。但是由于双孢蘑菇可以无性繁殖,部分农户和企业种植户经常通过组织分离,不规范地扩繁和保种,造成了生产经营和管理流通的过程中经常出现了同种异名和同名异种的现象,所以非常有必要对国内的主栽品种建立一套快速鉴别的方法。

2013年到2016年期间我所承担了国家科技支撑计划项目子课题“双孢蘑菇新品种培育及制种关键技术研究”,通过SSR分子标记技术对国内外的双孢蘑菇栽培菌株进行遗传多态性分析并建立遗传亲缘关系图谱。近期,我们在该课题的研究基础上经多次实验探索,开发获得了一组鉴别双孢蘑菇As2796、W192、福蘑38和A15的SSR-PCR鉴定方法,利用该分子标记能在菌株的菌丝阶段进行快速地鉴别,无需通过出菇根据农艺性状来判定,省时省力,这对双孢蘑菇生产过程中菌种或品种的真实性鉴定有着重要的意义。

发明内容

本发明基于分子标记技术,提供一种区分双孢蘑菇4个主栽品种的SSR-PCR鉴定方法。

本发明的一种区分双孢蘑菇4个主栽品种的SSR-PCR鉴定方法,是利用SSR分子标记对国内双孢蘑菇主栽品种As2796、W192、福蘑38和A15进行PCR扩增。

利用特异引物对国内双孢蘑菇主栽品种的基因组DNA进行SSR-PCR,不同的品种能扩增出特异性的图谱带型产物,所述特异引物的核昔酸序列为:

Scaf4_1k11F:5’-CAATCACAATCCCTCCAAGC-3’,

Scaf4_1k11R:5’-AAACGAATTAGGAACGGTGG-3’;

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