[发明专利]常温恒温快速检测伪狂犬病病毒的引物、探针、试剂及试剂盒

权利要求书

1.一种常温恒温快速检测伪狂犬病病毒的引物和探针，其特征在于，上下游引物和探针的序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示，具体如下：

上游引物：GCCGCCTGGTGCGAGCTGCAGAACAAGGACC；

下游引物：CCAGCGGGCGGCTGTAGCACGTGCCGCGCTC；

探针：

CCATCTCGCGGTGCGTGGAGGTGCGCGGCGGCG[F]G[H][B]CGTGCAGAACTCCATG—SpacerC3；

其中，F为荧光基团，H为四氢呋喃位点，B为猝灭基团，3’末端为SpacerC3修饰。

2.一种常温恒温快速检测伪狂犬病病毒的试剂，其特征在于，包含权利要求1所述的引物和探针。

3.根据权利要求2所述的试剂，其特征在于，该试剂还包括反应液，所述反应液包括聚乙二醇(PEG)、Tris、乙酸钾、三磷酸腺苷、磷酸肌酸二钠盐、脱氧核糖核苷三磷酸、蔗糖、甘油、重组酶、单链DNA结合蛋白、DNA聚合酶、辅助蛋白和核酸外切酶。

4.根据权利要求3所述的试剂，其特征在于，所述反应液经冻干后保存，常温恒温快速检测伪狂犬病病毒时再溶于双蒸水使用；所述冻干条件为：在-80℃条件下预冻3-4小时，预冻结束后放入真空冷冻干燥机中进行干燥，先于-20～-45℃干燥2-10小时。

5.根据权利要求3所述的试剂，其特征在于，所述重组酶选自T4噬菌体重组酶uvsX或大肠杆菌(E.coli)重组酶RecA；所述单链DNA结合蛋白选自T4或E.coli的gp32；所述DNA聚合酶选自Phi-29聚合酶、枯草芽胞杆菌PolI(Bsu)、Bst聚合酶或E.coli的DNA聚合酶IKlenow大片段；所述辅助蛋白为T4噬菌体uvsY蛋白；所述核酸外切酶选自E.coli的核酸外切酶exoIII或exoIV。

6.根据权利要求3所述的试剂，其特征在于，所述反应液中各组分的浓度为：重组酶210-290ng/μl；单链DNA结合蛋白190-270ng/μl；DNA聚合酶80-160ng/μl；辅助蛋白60-110ng/μl；核酸外切酶70-130ng/μl；聚乙二醇(PEG)2-4％；Tris 20-40mM；乙酸钾(KAc)100-140mM；酸磷酸腺苷(ATP)2-4mM；磷酸肌酸二钠盐(Creatinephosphatedisodiumsalt，PCr)40-60mM；脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP)250-300μM；蔗糖5-8％；甘油20-40％。

7.一种常温恒温快速检测伪狂犬病病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求1-6中任一项所述的试剂。