[发明专利]一种同时分离分析帕立骨化醇注射液中帕立骨化醇及异构体杂质的高效液相色谱法

说明书

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种同时分离分析帕立骨化醇注射液中帕立骨化醇及异构体杂质的高效液相色谱法，其特征是采用的色谱柱是以十八烷基键合硅胶为填充剂，以甲醇‑水为流动相A,甲醇为流动相B进行洗脱，所述流动相甲醇‑水的体积比为20‑30:70‑80，用于同时分离分析帕立骨化醇注射液中帕立骨化醇及异构体杂质。本方法可以更好的分离分析帕立骨化醇注射液中帕立骨化醇及异构体杂质20S，和或杂质24R，和或杂质7Z，和或杂质14R，和或杂质22Z，避免了干扰，弥补了因现有质量标准和文献均没有提供这一检测方法的空白，且具有简单、快速、准确度高等优点，对帕立骨化醇注射液的质量控制能提供技术支持。

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体涉及高效液相色谱法、流动相及一种同时分离分析帕立骨化醇注射液中帕立骨化醇及异构体杂质的高效液相色谱法。

背景技术

帕立骨化醇是一种化学物质，分子式是C27H44O3。帕立骨化醇是一种人工合成的具有生物活性的维生素D类似物，对骨化三醇侧链(D2)和A环(19－nor)进行修饰，主要用于治疗治疗慢性肾脏病。

帕立骨化醇是由美国雅培公司(Abbott)开发的选择性的、第3代维生素D受体激活剂,能够选择性激活维生素D受体(VDR)以及选择性地上调甲状腺内的钙敏感性受体(CaSR),更高效地抑制尿毒症患者PTH合成和分泌,同时更少发生高血钙症等不良反应。

帕立骨化醇注射液(商品名Zempalar)于1998年上市，用于治疗成人肾透析患者的继发性甲状腺功能亢进症。临床前研究及体外试验研究显示，帕立骨化醇需通过与维生素D受体(VDR)结合，引发维生素D反应通路的选择活化产生生物学作用。本品用于治疗接受血液透析的慢性肾功能衰竭患者的继发性甲状旁腺功能亢进。

制得的帕立骨化醇注射液中含有一些异构体杂质，比如异构体杂质20S、7Z、24R、14R、22Z，这些帕立骨化醇注射液中的异构体杂质会影响对帕立骨化醇注射液的质量控制，从而影响帕立骨化醇注射液的治疗效果。

鉴于现有的帕立骨化醇注射液的质量标准JX20060114并没有提出相关检测异构体杂质的分离分析方法，且也没有任何相关的文献报道。因此，寻找一种能简单、快速、准确的同时分离分析帕立骨化醇注射液中帕立骨化醇及其异构体杂质的高效液相色谱法很有必要。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一是提供一种同时分离分析帕立骨化醇注射液中帕立骨化醇及异构体杂质的高效液相色谱法，这种方法提高了分离分析的效率，准确的同时分离分析帕立骨化醇注射液中帕立骨化醇及其异构体杂质。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种同时分离分析帕立骨化醇注射液中帕立骨化醇及异构体杂质的高效液相色谱法，所述高效液相色谱法分析过程中采用的色谱柱是以十八烷基键合硅胶为填充剂，以甲醇-水为流动相A,甲醇为流动相B进行洗脱，所述流动相甲醇-水的体积比为20-30:70-80，所述异构体杂质为杂质20S，和或杂质24R，和或杂质7Z，和或杂质14R，和或杂质22Z；所述杂质20S、杂质24R、杂质7Z、杂质14R、杂质22Z的结构式如下所示：

优选的，所述流动相甲醇-水的体积比为25:75。

进一步的，所述流动相进行洗脱的流速为0.5-1.5ml/min。

优选的，所述流动相进行洗脱的流速为1.0ml/min。

进一步的，所述色谱柱的柱温为25℃-40℃。

优选的，所述色谱柱的柱温为35℃。

更进一步的，以溶液A和有机溶剂B按一定比例混合为流动相进行梯度洗脱，所述梯度比例为：