[发明专利]一种制备脱细胞生物组织材料的方法

权利要求书

1.一种制备脱细胞生物组织材料的方法，其特征在于，包括冻融处理、超高压处理和去核酸三道工序，其中超高压处理采用的压力为400-600MPa。

2.根据权利要求1所述制备脱细胞生物组织材料的方法，其特征在于，所述方法具体包括如下步骤：

步骤一，将生物组织上的脂肪剥离并对所述生物组织进行修剪和清洗；

步骤二，冻融处理：将步骤一处理后的生物组织反复冻融多次；

步骤三，超高压处理：将步骤二处理后的生物组织清洗密封，置于超高压仪器内进行超高压处理；

步骤四，去核酸：将步骤三处理后的生物组织，用核酸酶去除细胞残余核酸组分；

步骤五，保存：将步骤四处理后的生物组织清洗后密封保存。

3.根据权利要求2所述制备脱细胞生物组织材料的方法，其特征在于，所述步骤一具体包括如下步骤：无菌磷酸盐缓冲液浸没无纺布，将生物组织在浸润的无纺布上铺开，剥去脂肪组织层，然后将生物组织的纤维层朝上，用无尘布去除生物组织表面脂肪并剪去游离纤维，然后将生物组织裁切成规则小片进行后续处理，最后用生理盐水在室温下清洗多次，每次清洗3～5分钟。

4.根据权利要求2所述制备脱细胞生物组织材料的方法，其特征在于，所述冻融单次过程如下：将生物组织置于4℃预冷10～20min、然后在-80℃±10℃冷冻1.5～2h，最后在37℃水浴复温15～20min。

5.根据权利要求2所述制备脱细胞生物组织材料的方法，其特征在于，所述步骤三具体包括如下步骤：在无菌D-Hanks溶液中清洗后置入浸满D-Hanks溶液的塑料袋中密封，再将密封于塑料袋的生物组织置入超高压机器内，在400～500MPa以及4℃条件下处理20～30min。

6.根据权利要求2所述制备脱细胞生物组织材料的方法，其特征在于，所述步骤四具体包括如下步骤：将生物组织置于核酸酶溶液中，在37℃恒温摇床中以100r/min的振荡速度冲洗24～72h。

7.根据权利要求6所述制备脱细胞生物组织材料的方法，其特征在于，所述核酸酶溶液中含有核糖核酸酶A(RNase A)和脱氧核糖核酸酶I(DNase I)，所述RNase A的浓度为10～20μg/mL，所述DNase I的浓度为100～200μg/mL。

8.根据权利要求2所述制备脱细胞生物组织材料的方法，其特征在于，所述步骤五具体包括如下步骤：用磷酸盐缓冲液漂洗所述生物组织1天后，置入4℃、含有抗生素的磷酸盐缓冲液中密封保存。

9.根据权利要求2所述制备脱细胞生物组织材料的方法，其特征在于，提取的新鲜生物组织经预处理后运送至实验室，当日进行所述步骤一；所述新鲜生物组织选自牛心包、猪心包、牛心脏瓣膜、猪心脏瓣膜、猪小肠、牛血管、猪血管、牛皮或猪皮。

10.根据权利要求9所述制备脱细胞生物组织材料的方法，其特征在于，所述预处理包括如下步骤：将获取的新鲜生物组织置于3-5℃的无菌生理盐水中，采用pH值为6.8～8.6的磷酸盐缓冲液或pH值为6.8～8.6的D-Hanks溶液在室温下清洗多次，每次3-5分钟，直至生物组织无血迹或血水，最后将清洗达标的生物组织保存在含有抗生素的生理盐水中。