[发明专利]核苷酸组合物、试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种核苷酸组合物，包括组合物一、组合物二以及一引物对，

所述组合物一的5’端到3’端依次由银纳米簇成核序列和识别序列组成，所述银纳米簇成核序列用于与银纳米离子结合形成银纳米簇；

所述组合物二的5’端到3’端依次由银纳米簇激发序列的杂交互补序列和识别序列组成，所述组合物一中的识别序列和组合物二中的识别序列具有相同的核苷酸序列；

所述一引物对包括引物1和引物2，所述引物1的5’端与所述组合物二的3’端连接，组成引物1与组合物二连接物；

所述一引物对为可特异性扩增靶标序列，获得单链的靶标序列；

所述单链靶标序列的3’端到5’端依次由组合物二中的银纳米簇激发序列、识别序列的杂交互补序列以及靶标序列组成；

所述的识别序列的杂交互补序列可与所述组合物一的识别序列结合，所得产物可激发银纳米簇发出荧光。

2.根据权利要求1所述的核苷酸组合物，其特征在于包括以下（1）-（3）的一项或多项：

（1）所述银纳米簇成核序列为富C序列；所述银纳米簇激发序列为富G序列；

（2）所述识别序列为富A、T序列；

（3）所述引物1与所述引物2的摩尔比在1:30以下。

3.根据权利要求1或2所述的核苷酸组合物，其特征在于，包括下述（1）-（4）中的至少一种：

（1）所述银纳米簇成核序列为序列表中SEQ ID №：7所示核苷酸序列；

（2）所述银纳米簇激发序列的杂交互补序列为序列表中SEQ ID №：4所示核苷酸序列；

（3）所述识别序列为序列表中SEQ ID №：5所示核苷酸序列；

（4）所述引物1与所述引物2的摩尔比为1:60。

4.一种试剂盒，其特征在于包括银纳米离子和权利要求1-3任一项中的核苷酸组合物。

5.一种使用权利要求1中所述的组合物进行非诊断目的的检测方法，其特征在于，

利用组合物一制备银纳米簇探针；

利用靶标序列、引物1与组合物二连接物、引物2进行非对称PCR反应；

非对称PCR产物与所述银纳米簇探针杂交结合。

6.根据权利要求5所述的一种检测方法，其特征在于包括以下（1）-（5）的一项或多项：

（1）所述利用组合物一制备银纳米簇探针方法包括：

将组合物一的水溶液与磷酸钠缓冲液混和后，再与硝酸银溶液混合，然后再加入NaBH₄溶液混和后室温避光孵育14小时以上；

（2）所述非对称PCR反应体系中所述引物1与所述引物2的摩尔比在1:30以下；

（3）所述非对称PCR产物与银纳米簇探针杂交结合包括将非对称PCR反应完成后的反应体系和制备好的银纳米簇探针溶液混和，90-95℃水浴1min，冷却至室温；

（4）所述银纳米簇成核序列为富C序列；所述银纳米簇激发序列为富G序列；

（5）所述识别序列为富A、T序列。