[发明专利]治疗视网膜色素变性疾病的基因治疗载体

说明书

本发明涉及治疗视网膜色素变性疾病的基因治疗载体。具体地，对PROM1基因编码序列进行了针对性特殊优化设计，从而获得了一种特别适合在哺乳动物(如人)细胞(尤其是感光细胞)中高效表达PROM1蛋白的核苷酸序列，并构建了一种表达正常人源PROM1蛋白的重组AAV病毒，并在PROM1敲除小鼠模型中证明其有效性。实验结果表明，相对于未优化的编码序列，经过特殊优化后的PROM1编码序列(SEQ ID NO.:1)的表达量显著提高了3倍以上，非常适合在哺乳动物(尤其是人)细胞内表达，能有效治疗视网膜色素变性疾病等眼部疾病。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及治疗视网膜色素变性疾病的基因治疗载体。

背景技术

视网膜色素变性(retinitis pigmentosa，RP)是一组以遗传性、进行性感光细胞丧失且最终导致视网膜变性萎缩为主要特征的疾病，伴有视网膜色素上皮(RPE)细胞营养不良退行性病变，文献报道在全球范围内RP的患病率约为1/4 000，超过150万患者患有进行性视觉障碍。病变通常从视网膜赤道部开始，并向黄斑和中央凹推进。其主要表现为夜盲、进行性周围视野下降等，因感光细胞死亡导致视力下降。眼底可见视网膜血管变细呈白线样狭窄，黄斑区萎缩样改变，始于赤道部的骨细胞样色素沉着并逐渐向后极部发展。视网膜电图可见a、b波振幅下降，潜伏期延长。患者还可伴有听力丧失、代谢异常、神经病变以及肝脏或肾脏病变等全身表现。

随着科学技术的不断进步，人们对RP的疾病特征已有一定了解，感光细胞的死亡是RP的主要病理学特征，最终将导致患者失明。既往研究发现RPE细胞对感光细胞外节脱落膜盘的吞噬功能下降，未被吞噬的膜盘在视网膜外层堆积，破坏了原有的视网膜结构，导致感光细胞变性死亡，从而引发RP。其致病机制主要为基因突变所导致的相应正常蛋白功能异常或缺失。由于其显著的遗传异质性及复杂的致病机制，目前尚无明确的针对此病的治疗手段。

RP有多种遗传方式，常染色体显性遗传、常染色体隐性遗传及X染色体连锁遗传，目前为止已发现64个基因与RP的发生相关(https://sph.uth.edu/retnet/sum-dis.htm)，包括PROM1。随着人类基因图谱成功构建、分子生物学技术迅猛发展，病毒载体成功应用，使得RP的基因治疗方面已经取得了一定进展。很多实验研究为RP的基因疗法应用于临床做了很多铺垫和前期工作。因腺相关病毒(Adeno-associated virus,AAV)较其他病毒载体小，无致病性，可转染正在分裂和未分裂的细胞等特性，基于AAV载体的针对眼部特别是遗传性视网膜退行性病变的基因治疗方法受到了广泛的关注。

因此，本领域急需开发能有效治疗遗传性视网膜退行性病变的基因治疗方法和治疗药物。

发明内容

本发明的目的是提供一种能有效治疗遗传性视网膜退行性病变的基因治疗药物。

本发明的另一目的是提供一种表达正常人源PROM1蛋白的重组AAV病毒。

本发明的第一方面，提供了一种核苷酸序列，所述核苷酸序列编码PROM1蛋白，且所述核苷酸序列选自下组：

(a)所述核苷酸序列如SEQ ID NO.:1所示；和

(b)所述核苷酸序列与SEQ ID NO.:1所示的核苷酸序列有≥95％相同性，优选地≥98％，更优选地≥99％；

(c)与(a)或(b)所述的核苷酸序列互补的核苷酸序列。

在另一优选例中，所述核苷酸序列包括DNA序列、cDNA序列、或mRNA序列。

在另一优选例中，所述核苷酸序列包括单链序列和双链序列。

在另一优选例中，所述核苷酸序列包括与SEQ ID NO.:1完全互补的核苷酸序列。

本发明的第二方面，提供了一种表达盒，所述表达盒含有本发明第一方面所述的核苷酸序列。