[发明专利]一种用于修复HBB1基因点突变的gRNA、基因编辑系统、表达载体和基因编辑试剂盒在审
| 申请号： | 201811282396.8 | 申请日： | 2018-10-30 |
| 公开（公告）号： | CN109486814A | 公开（公告）日： | 2019-03-19 |
| 发明（设计）人： | 祝海宝;刘洁;黄雨亭;陶米林;梁福才 | 申请（专利权）人： | 广东赤萌医疗科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/90;C12N15/85;C12N5/10;A61K31/7105;A61K48/00;A61P7/06 |
| 代理公司： | 广州三环专利商标代理有限公司 44202 | 代理人： | 宋静娜;郝传鑫 |
| 地址： | 510000 广东省广州市高新*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基因 修复 编辑系统 表达载体 点突变 试剂盒 地中海贫血症 镰刀型贫血 造血干细胞 突变位点 致癌 突变 安全 细胞 拓展 治疗 | ||
1.一种用于修复HBB1基因点突变的gRNA，其特征在于，包括与Sp Cas9配合使用的gRNA和与Sa Cas9配合使用的gRNA中的至少一种；
所述与Sp Cas9配合使用的gRNA的靶序列如SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:11中的一种所示；
所述与Sa Cas9配合使用的gRNA的靶序列如SEQ ID NO:15～SEQ ID NO:27中的一种所示。
2.一种用于修复HBB1基因点突变的基因编辑系统，其特征在于，所述基因编辑系统包括CRISPR-Cas9系统和同源重组片段；
所述CRISPR-Cas9系统包括Sp Cas9，以及与Sp Cas9配合使用的gRNA，或Sa Cas9，以及与Sa Cas9配合使用的gRNA；
所述与Sp Cas9配合使用的gRNA的靶序列如SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:11中的一种所示；
所述与Sa Cas9配合使用的gRNA的靶序列如SEQ ID NO:15～SEQ ID NO:27中的一种所示；
所述同源重组片段包括上游同源臂和下游同源臂，所述上游同源臂用于修复HBB1基因β17(A→T)位点突变，所述下游同源臂用于修复HBB1基因β41-42(-TCTT)位点突变。
3.根据权利要求2所述的基因编辑系统，其特征在于，所述同源重组片段还包括tNGFR基因编码序列和tNGFR基因的启动子，所述tNGFR基因编码序列和tNGFR基因启动子均位于所述上游同源臂和下游同源臂之间，所述tNGFR基因启动子位于所述tNGFR基因编码序列的上游。
4.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体表达如权利要求1所述的gRNA或者表达如权利要求2-3任一所述的基因编辑系统。
5.一种基因编辑试剂盒，其特征在于，所述基因编辑试剂盒包括如权利要求4所述的表达载体。
6.一种造血干细胞，其特征在于，所述造血干细胞含有如权利要求2-3任一所述的基因编辑系统或者如权利要求4所述的表达载体。
7.如权利要求1所述的gRNA、如权利要求2-3任一所述的基因编辑系统在制备治疗地中海贫血症和/或镰刀型贫血症的药物中的用途。
8.如权利要求4所述的表达载体在制备治疗地中海贫血症和/或镰刀型贫血症的药物中的用途。
9.如权利要求5任一所述的基因编辑试剂盒在制备治疗地中海贫血症和/或镰刀型贫血症的药物中的用途。
10.如权利要求6所述的造血干细胞在制备治疗地中海贫血症和/或镰刀型贫血症的药物中的用途。
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