[发明专利]一种贝类水产品表面孔雀石绿的现场快速检测方法

说明书

本发明涉及一种贝类水产品表面孔雀石绿的现场快速检测方法，属于食品安全分析检测领域。主要技术方案如下：首先，使用种子生长法制备得到尺寸均一、形状规则的金纳米立方。然后将水中分散的金纳米立方转移到乙醇中。通过液液界面自组装技术将金纳米立方转移到滤纸上制备SERS基底。使用滤纸SERS基底的边缘蘸取贝类水产品的表面和沟壑处进行样品的提取和拉曼光谱采集。本发明提出的检测方法操作方便，无需复杂的样品预处理步骤。能够用于贝类水产品表面孔雀石绿残留的现场快速检测，值得推广。

技术领域

本发明涉及食品安全分析检测领域，尤其涉及一种贝类水产品表面残留孔雀石绿的现场快速检测方法。

背景技术

孔雀石绿，作为一种三氯甲烷类染料，常用于水产养殖和运输中的杀菌剂使用。然而，由于其具有致癌、致畸变的副作用，我国农业部将其放入《食品动物禁用的兽药及其它化合物清单》，明确规定孔雀石绿在水产养殖和运输中禁止使用。然而由于孔雀石绿能够有效的防止水产品获病而死亡，因此不良商家为了追求经济效益仍然在养殖和运输过程中使用孔雀石绿。目前，水产品中孔雀石绿的检测方法主要包括高效液相色谱法、色谱联用质谱法以及表面增强拉曼光谱法等。上述方法具有样品前处理步骤繁琐、需要大型仪器设备以及耗时等缺点。水产品具有快速运输和销售的市场特点，上述方法显然无法满足对水产品的孔雀石绿的现场快速检测需求。

表面增强光谱(surface enhanced raman spectroscopy,SERS)技术作为一种新兴的光谱分析技术，具有灵敏度高、特异性好、检测时间短，无需复杂样品预处理等优点。目前已广泛应用于多种食品中违禁添加剂的快速分析和检测。目已有研究人员使用多种SERS基底对水体中和水产品养殖水中的孔雀石绿进行了检测。然而对于贝类水产品这种具有复杂形状的水产品，采用现有技术的方法检测其表面残留的孔雀石存在技术难度。目前尚未见使用SERS技术对其表面残留的孔雀石绿进行检测的研究。

发明内容

为弥补现有技术的空白，本发明提供一种贝类水产品表面孔雀石绿的现场快速检测方法。本发明利用界面自组装技术将金纳米立方组装在滤纸上得到具有样品提取功能的滤纸SERS基底，然后使用该基底对贝类水产品表面的孔雀石绿进行了原位提取和检测。本发明为贝壳类水产品表面污染物的快速检测提供了一种简便实用的分析方法。

为达到这一技术目的，本发明采用的技术方案是：一种贝类水产品表面孔雀石绿的现场快速检测方法，首先，利用种子生长法制备尺寸均一、形貌规则的金纳米立方。其次，将水中分散的金纳米立方转移到乙醇中。然后，使用液/液界面自组装技术构筑金纳米立方单层膜并将其转移到滤纸上制备得到滤纸SERS基底。最后将该基底用于贝类表面孔雀石绿的采集和检测。

本发明首要目的是请求保护一种表面增强光谱基底的制备方法，包括以下步骤：

S1.1在阳离子表面活性剂体系下，使用三步种子生长法制备得到不同尺寸的金纳米立方；所述的阳离子表面活性剂体系为：在5单位体积浓度为0.2M的十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)溶液中加入5单位体积浓度为0.5mM的氯金酸溶液混合，然后加入0.6单位体积浓度为10mM的硼氢化钠水溶液，得到种子溶液；将该种子溶液加入到含有0.25mM氯金酸、50mM十六烷基三甲基氯化铵(CTAC)和0.325mM抗坏血酸(AA)混合液中继续生长，得到金纳米立方；

S1.2使用多步离心和分散的方法将金纳米立方表面的阳离子表面活性剂替换为聚乙烯比咯烷酮(PVP)，并将水中分散的金纳米立方替换到乙醇中分散。

S1.3将步骤S1.2得到的金纳米立方乙醇溶液与二氯甲烷混合，依次加入水和正己烷，使液液界面上得到金立方单层膜；将正己烷抽走，取滤纸浸入金立方单层膜下面，随后缓慢将滤纸抽出，金立方单层膜便组装在滤纸上，得到滤纸SERS基底。

本发明另一个目的是请求保护采用上述方法制备的滤纸SERS基底对贝类水产品表面孔雀石绿的现场快速检测方法，包括以下步骤：