[发明专利]以苹果渣为原料制备苹果酸的方法

权利要求书

1.一种以苹果渣为原料制备苹果酸的方法，其特征在于将苹果渣依次经过去毒处理、接种、发酵和提取的工艺步骤后制得L-苹果酸产品。

2.根据权利要求1所述的制备苹果酸及微晶纤维素的方法，其特征在于包括下述的工艺步骤：

2.1苹果酸的制备

2.1.1去毒处理--将一定量的苹果原渣放入不锈钢反应容器内，加入6～10倍量的纯净水，保持温度在25℃时，在容器内分别加入占渣水量0.02％的维生素C、1％的柠檬素和0.1％的NaCl，浸泡24小时后，渣液通过离心机离心，去除水分，得经去毒处理后的苹果渣；

2.1.2接种--将保存在麦芽汁琼脂斜面上的曲霉₁₆₃孢子用无菌水洗下，接到三角瓶中；瓶中装有液体培养基，在22～28℃静置培养2～4天，待长出大量孢子后接到内装有种子培养基的种子罐中，装液量占罐体容积量的70％；三角瓶和种子罐内装有下述种子培养基(克/升)：

经去毒处理后的苹果渣50，葡萄糖10，

豆饼粉10， FeSO₄ 0.5，

K₂HPO₄0.2，NaCl 0.01，

MgSO₄ 0.1，CaCO₃ 60，

在对罐内物质进行100℃灭菌20～30分钟后，冷至40℃以下，加入单独灭菌的CaCO₃，接种曲霉₁₆₃孢子后，在25～34℃通气搅拌培养，通气量0.15～0.3vvm，罐压维持100kPa，按每50升罐加20毫升的量加入泡敌抑制泡沫生成，培养18～20小时后接入生产罐；

2.1.3发酵--将经2.1.2步骤后的接种物在生产罐内采用进行发酵培养，生产罐装有下述发酵培养基(克/升)：

经去毒处理后的苹果渣60，葡萄糖15，

豆饼粉10，FeSO₄0.5，

K₂HPO₄0.2，NaCl 0.01，

MgSO₄0.1，CaCO₃60，

发酵培养基除CaCO₃以外，直接在生产罐内配制，在缓慢搅拌下直接通蒸汽升温至100℃，维持20分钟灭菌，冷至40℃时，加入经120℃干热2小时的单独灭菌的CaCO₃；当品温降到35℃时，接种10％种子培养基液，通气搅拌进行发酵，发酵时控制温度25℃～34℃，通气量0.4vvm，搅拌转速90r/min，发酵24小时后，加入罐内物料量0.2％的解脂假丝酵母ATTCC₈₆₆₂细胞混合酶液，继续发酵过程约需30～40小时，待残糖降到1克/升以下，得成熟的浓浆状发酵醪；

2.1.4提取苹果酸--将经1.2.3步骤后得到的发酵醪放入酸解糟中，用无砷硫酸在搅拌下缓缓进行酸解至pH2.0～4.0，一般为pH2.5，酸解2个小时后，采用硷中和，过滤，再重复1次，然后，选择D301为提纯L-苹果酸的树脂，对生产中混合料液的L-苹果酸溶液进行分离，分离条件为pH＝3.4，流速＝1.5～2.5毫升/分。