[发明专利]一种NK细胞exosomes可控规模化的制备方法在审
| 申请号： | 201811290297.4 | 申请日： | 2018-10-31 |
| 公开（公告）号： | CN109439625A | 公开（公告）日： | 2019-03-08 |
| 发明（设计）人： | 崔大祥;潘少君;张倩;章阿敏;黄志成 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783 |
| 代理公司： | 上海科盛知识产权代理有限公司 31225 | 代理人： | 赵志远 |
| 地址： | 200030 *** | 国省代码： | 上海;31 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 超高速离心 制备 沉淀 磷酸盐缓冲液 取上清液 规模化 稀释液 可控 培养基上清液 标志性蛋白 蛋白表达量 离心上清液 浓缩上清液 安全系数 粒径分布 超滤管 低转速 高转速 透析袋 稀释 透析 并用 携带 检测 | ||
1.一种NK细胞exosomes可控规模化的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)收集NK细胞培养基上清液，并用磷酸盐缓冲液进行稀释，得到稀释液；
(2)将稀释液依次在低转速和高转速下离心，且每次离心后取上清液弃沉淀，在高转速下离心后得到离心上清液；
(3)将离心上清液置于超滤管中进行离心，取上清液，得到的浓缩上清液进行超高速离心，超高速离心后取沉淀；
(4)将步骤(3)超高速离心后得到的沉淀置于磷酸盐缓冲液中并转移至透析袋中进行透析，即得所述NK细胞exosomes。
2.根据权利要求1所述的一种NK细胞exosomes可控规模化的制备方法，其特征在于，所述的磷酸盐缓冲液中包含KCl、NaCl、KH2PO4和Na2HPO4，其中，所述KCl、NaCl、KH2PO4和Na2HPO4的质量比为(0.1～0.3)：(6～10)：(0.2～0.3)：(1～2)，其中，所述磷酸盐缓冲液中盐的总质量浓度为8.88-9.88g/L。
3.根据权利要求1所述的一种NK细胞exosomes可控规模化的制备方法，其特征在于，所述的磷酸盐缓冲液与NK细胞培养基上清液的体积比为(1～40)：1。
4.根据权利要求1所述的一种NK细胞exosomes可控规模化的制备方法，其特征在于，所述的低转速为2000～3000rpm，低转速下离心时间为5～15min。
5.根据权利要求1所述的一种NK细胞exosomes可控规模化的制备方法，其特征在于，所述的高转速为8000～11000rpm，高转速下离心时间为10～35min。
6.根据权利要求1所述的一种NK细胞exosomes可控规模化的制备方法，其特征在于，所述超滤管的规格为100～150kDa，在超滤管中的离心转速为3000～4000rpm，离心时间为10～30min。
7.根据权利要求1所述的一种NK细胞exosomes可控规模化的制备方法，其特征在于，所述超高速离心的转速为8000～100000g，超高速离心的时间为60～90min。
8.根据权利要求1所述的一种NK细胞exosomes可控规模化的制备方法，其特征在于，所述透析袋的孔径为30～35nm，透析时间为3～9h，透析时加入的磷酸盐缓冲液与步骤(3)超高速离心后得到的沉淀的质量比为(200～5000)：1。
9.根据权利要求1～8任一所述的一种NK细胞exosomes可控规模化的制备方法，其特征在于，整个制备过程中，温度为4～37℃。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于上海交通大学，未经上海交通大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201811290297.4/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
