[发明专利]一种检测淡色库蚊抗药性基因突变的引物、探针及方法

权利要求书

1.一种检测淡色库蚊抗药性基因突变的专用引物对，所述引物对由F和R组成，其特征在于，所述F具有序列表中SEQ ID №：1所示核苷酸序列，所述R具有序列表中SEQ ID №：2所示核苷酸序列。

2.一种检测淡色库蚊抗药性基因突变的探针，其特征在于，所述探针包括下述1)-6)中的至少一种：

1)探针P1具有序列表中SEQ ID №：3所示核苷酸序列；

2)探针P2具有序列表中SEQ ID №：4所示核苷酸序列；

3)探针P3具有序列表中SEQ ID №：5所示核苷酸序列；

4)探针P1为将具序列表中SEQ ID №：3所示核苷酸序列的核苷酸的3’末端增加MGB基团、5’端标记FAM发光基团后制备得到；

5)探针P2为将具序列表中SEQ ID №：4所示核苷酸序列的核苷酸的3’末端增加MGB基团、5’端标记FAM发光基团后制备得到；

6)探针P3为将具序列表中SEQ ID №：5所示核苷酸序列的核苷酸的3’末端增加MGB基团、5’端标记VIC发光基团后制备得到。

3.一种检测淡色库蚊抗药性基因突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的专用引物对和/或权利要求2所述的至少一种探针。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括下述1)-3)中的至少一种：

1)试剂A，所述试剂A包括权利要求1所述的专用引物对、权利要求2的5)所述的探针P2和权利要求2的6)所述的探针P3；

2)试剂B，所述试剂B包括权利要求1所述的专用引物对、权利要求2的4)所述的探针P1和权利要求2的6)所述的探针P3；

3)TaqMan反应缓冲液。

5.一种检测或辅助检测淡色库蚊中kdr基因的突变位点的方法，其特征在于，所述方法包括使用权利要求1所述的专用引物对、权利要求2所述的至少一种探针和/或权利要求3或4所述的至少一种试剂盒进行检测。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述方法包括：

使用权利要求4所述的试剂A对待测淡色库蚊进行TaqMan PCR扩增反应，得到A反应产物；使用权利要求4所述的试剂B对待测淡色库蚊进行TaqMan PCR扩增反应，得到B反应产物；

检测A反应产物和B反应产物：

若A反应产物在FAM和VIC通道均无信号，且B反应产物仅在FAM通道有信号，则所述kdr基因不含或候选不含有所述突变位点，突变位点所在位置的碱基为TTG/TTG；

若A反应产物在FAM通道有信号且在VIC通道无信号，且B反应产物在FAM和VIC通道均无信号，则所述kdr基因突变位点为或候选为L1014C，突变位点所在位置的碱基为TGT/TGT；

若A反应产物在FAM通道无信号且在VIC通道有信号，且B反应产物仅在VIC通道有信号，则所述kdr基因的突变位点为或候选为L1014F，突变位点所在位置的碱基为TTT/TTT；

若A反应产物在FAM通道有信号且在VIC通道无信号，且B反应产物仅在FAM通道有信号，则所述kdr基因的突变位点为或候选为L1014C，突变位点所在位置的碱基为TTG/TGT；

若A反应产物在FAM通道无信号且在VIC通道有信号，且B反应产物在FAM通道和VIC通道均有信号，则所述kdr基因突变位点为或候选为L1014F，突变位点所在位置的碱基为TTG/TTT；

若A反应产物在FAM通道和VIC通道均有信号，且B反应产物仅在VIC通道有信号，则所述kdr基因突变位点为或候选为L1014F和L1014C；突变位点所在位置的碱基为TTT/TGT。