[发明专利]一种转Sm1-chit42木霉工程菌构建及其应用在审
| 申请号： | 201811298168.X | 申请日： | 2018-11-01 |
| 公开（公告）号： | CN109402159A | 公开（公告）日： | 2019-03-01 |
| 发明（设计）人： | 刘宏毅;夏海;陈捷;刘健;邵家华 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学;侨昌生物科技（上海）有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/80 | 分类号： | C12N15/80;C12N1/15;A01N63/04;A01P3/00;C12R1/885 |
| 代理公司： | 上海汉声知识产权代理有限公司 31236 | 代理人： | 陈少凌 |
| 地址： | 200240 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 工程蛋白 木霉 工程菌构建 粗提物 原粉 哈茨木霉菌 黄瓜白粉病 结构生物学 生物信息学 植物抗病性 促进生长 定向分子 黄瓜植株 几丁质酶 融合蛋白 融合基因 疏水蛋白 有效防治 基因 发酵液 工程菌 防效 构建 菌株 喷洒 应用 激活 | ||
1.一种融合基因过表达载体pCAMBIA1300th-Sm1-linker-Chit42，其特征在于，所述融合基因过表达载体是通过融合PCR的方法，将TrpC启动子序列、TrpC终止子序列和Sm1-Chi42基因融合成表达框，并通过双酶切的方法构建而得的。
2.一种转双价Sm1-chit42木霉工程菌，其特征在于，所述工程菌的构建包括：以哈茨木霉T.harzianumT30菌株为出发菌株，构建融合基因过表达载体pCAMBIA1300th-Sm1-linker-Chit42，整合到基因组上，表达获得Sm1-Chit42工程蛋白。
3.如权利要求2所述的转双价Sm1-chit42木霉工程菌，其特征在于，通过重叠PCR构建Sm1-linker-chit42融合过表达框。
4.如权利要求3所述的转双价Sm1-chit42木霉工程菌，其特征在于，所述Sm1-linke r-chit42融合过表达框采用柔性甘氨酸重复序列作为linker连接Sm1和Chit42。
5.如权利要求3所述的转双价Sm1-chit42木霉工程菌，其特征在于，采用BamH I和KpnI双酶切，将所述Sm1-linkker-chit42融合过表达框连接到载体pCAMBIM1300th上，转化至大肠杆菌上后筛选获得所述融合基因过表达载体pCAMBIA1300th-Sm1-linker-Ch it42。
6.如权利要求2所述的转双价Sm1-chit42木霉工程菌，其特征在于，通过ATMT的方法将所述融合基因过表达载体pCAMBIA1300th-Sm1-linker-Chit42导入哈茨木霉T.harzianumT30菌株中，筛选获得阳性过表达转双价Sm1-chit42木霉工程菌。
7.如权利要求2所述的转双价Sm1-chit42木霉工程菌，其特征在于，所述Sm1-Chit42工程蛋白大小为54.6Kda。
8.如权利要求7所述的转双价Sm1-chit42木霉工程菌，其特征在于，所述Sm1-Chit42工程蛋白用于激活植株的防御反应。
9.一种如权利要求2所述的转双价Sm1-chit42木霉工程菌在防治植物白粉病和/或植物灰霉病中的用途。
10.如权利要求9所述的用途，其特征在于，所述转双价Sm1-chit42木霉工程菌发酵提取得到的Sm1-Chit42工程蛋白作为防治植物白粉病和/或植物灰霉病药剂的活性组分。
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