[发明专利]黄曲霉毒素生物合成通路靶向代谢组分析方法

权利要求书

1.黄曲霉毒素生物合成通路靶向代谢组分析方法，其特征在于：包括如下步骤：进样，经液相色谱-质谱检测，得到包含一级和二级质谱信息的原始数据，对照质谱标准谱库进行定性分析获得已有标谱化合物的定性结果；根据已有标谱化合物的质谱图信息，生成这些化合物的多级质谱碎裂树，同时根据一级质谱质荷比提取样品中其他没有标谱的黄曲霉毒素生物合成路径化合物，根据这些化合物的二级质谱信息生成它们的多级质谱树，然后根据生物合成通路中相临化合物结构相似、质谱行为相似的规律，基于质谱碎裂规律来定性没有标谱化合物，从而实现未知化合物定性分析。

2.根据权利要求1所述的黄曲霉毒素生物合成通路靶向代谢组分析方法，其特征在于：所述定性分析时对于有标谱化合物，依据化合物的高分辨一级质谱信息，根据实际测量值与计算值来计算质量偏差，用高分辨率的一级精确质量数来初步定性，同时结合色谱保留时间和二级质谱信息比对质谱标准谱库进行精准定性；对于无标谱化合物，依据化合物的高分辨一级质谱信息，根据实际测量值与计算值来计算质量偏差，用高分辨率的一级精确质量数来初步定性，同时结合色谱保留时间，将其质谱碎裂树与黄曲霉毒素生物合成通路中临近的目标有标谱化合物的质谱碎裂树进行相似性比较，然后基于质谱碎裂规律进行化合物的准确定性。

3.根据权利要求1所述的黄曲霉毒素生物合成通路靶向代谢组分析方法，其特征在于：还包括对定性分析得到的化合物进行定量分析；所述的定量分析为：根据所得黄曲霉毒素通路化合物定性结果，将黄曲霉毒素通路化合物中已有标准品化合物配制成一系列浓度的标准溶液，采用内标法或外标法绘制标准曲线进行定量分析；

对于无标准品化合物，通过在进样中加入结构相似内标物后得到标准样品的进样溶液，基于内标法进行定量分析。

4.根据权利要求3所述的黄曲霉毒素生物合成通路靶向代谢组分析方法，其特征在于：所述无标准品化合物的定量分析方法为：在进样中加入结构相似内标物后得到标准样品的进样溶液，进行质谱分析，以标准溶液中通路化合物与内标的浓度比值为横坐标，通路化合物与内标物的准分子离子峰强度比值为纵坐标，绘制标准曲线，然后基于标准曲线进行无标准品化合物的黄曲霉毒素通路化合物的定量分析；所述内标物为大黄酸，。

5.根据权利要求1所述的黄曲霉毒素生物合成通路靶向代谢组分析方法，其特征在于：结合多级质谱树生成软件生成多级质谱碎裂树。

6.根据权利要求1所述的黄曲霉毒素生物合成通路靶向代谢组分析方法，其特征在于：所述进样为已知产黄曲霉毒素霉菌的发酵代谢产物的提取液，所述的提取溶剂为甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯和HCOOH按甲醇：二氯甲烷：乙酸乙酯：HCOOH的体积比为0.3-0.4：0.3-0.4：0.3-0.4：0.05-0.2配比得到的混合溶剂。

7.根据权利要求6所述的黄曲霉毒素生物合成通路靶向代谢组分析方法，其特征在于：将已知产黄曲霉毒素霉菌接种到沙氏液体培养基上，摇床培养，然后将得到的霉菌菌丝样品使用冷甘油缓冲液淬灭结合快速过滤法分离，PBS清洗后，加入提取溶剂结合细胞超声破碎进行代谢物提取；将得到的提取液高速离心后，膜过滤，稀释后采用高效液相色谱轨道阱高分辨质谱进行液相色谱-质谱分析。

8.根据权利要求7所述的黄曲霉毒素生物合成通路靶向代谢组分析方法，其特征在于：所述冷甘油缓冲溶液淬灭剂是由丙三醇和NaCl溶液以1:1～2:1的体积比混合而成，冷甘油缓冲溶液淬灭剂保存于-40℃以下冰箱备用。

9.根据权利要求1所述的黄曲霉毒素生物合成通路靶向代谢组分析方法，其特征在于：所述分析方法使用高效液相色谱上进行色谱分离，色谱柱为C₁₈反向色谱柱；使用OrbitrapFusion静电轨道阱高分辨质谱做质谱分析，采用高分辨质谱正负离子切换采集模式。

10.根据权利要求1所述的黄曲霉毒素生物合成通路靶向代谢组分析方法在黄曲霉毒素靶向防控机制研究中监测黄曲霉毒素生物合成阻断靶点或用于黄曲霉毒素通路化合物跨膜转运机制研究中黄曲霉毒素生物合成通路化合物在胞内细胞器间及跨膜转运到细胞外过程中的监测，以及用于不同胁迫条件下黄曲霉毒素生物合成时间序列动态积累规律研究中的应用。