[发明专利]黄曲霉毒素生物合成通路靶向代谢组分析方法

说明书

本发明涉及黄曲霉毒素生物合成通路靶向代谢组分析方法，包括如下步骤：包括如下步骤：进样，经液相色谱‑质谱检测，得到包含一级和二级质谱信息的原始数据，对照质谱标准谱库进行定性分析获得已有标谱化合物的定性结果；根据已有标谱化合物的质谱图信息，生成多级质谱碎裂树，同时根据一级质谱质荷比提取样品中其他没有标谱的黄曲霉毒素生物合成路径化合物，生成多级质谱树，然后根据生物合成通路中相临化合物结构相似、质谱行为相似的规律，然后基于质谱碎裂规律来定性没有标谱化合物，从而实现未知化合物定性分析。

技术领域

本发明涉及黄曲霉毒素生物合成通路靶向代谢组分析方法，属于分析检测领域。

背景技术

黄曲霉产生臭名昭著的强致癌次生代谢产物黄曲霉毒素，食用被黄曲霉毒素污染的农产品可引发肝癌，急性毒性，幼儿出生畸形等不良反应。在全世界范围内，食品或饲料中黄曲霉毒素的发生污染对人类健康产生了巨大的影响，同时每年因黄曲霉毒素污染而造成巨大的经济损失。自60年代的火鸡事件以来，研究人员广泛开展了黄曲霉毒素分析方法和风险评估等研究，自80年代以来，黄曲霉毒素生物合成中的结构基因及其调控基因也广泛地吸引着研究着的注意力。到目前为止，黄曲霉毒素生物合成通路涉及的超过20个基因，75kb的基因簇以及几十个中间体已经被表征。这个通路已经作为一个研究其他真核次生代谢物和其他真菌毒素的范例。

几种产前控制黄曲霉毒素的策略已经被提出，靶向控制黄曲霉毒素生物合成作为一个具有较大潜力和应用前景的抗产毒方法已经引起了研究人员的极大兴趣。其他策略包括利用不产毒真菌，生物防治细菌和提高宿主抗性来抑制产毒真菌菌株的生长和产毒。此外，在产后通过控制仓储条件或利用诸如天然抗真菌试剂来控制真菌生长和产毒的策略也已经被提出。这些策略在一定程度上已经取得了成功。尽管研究人员能够利用实时定量PCR或转录技术在分子水平上去揭示可能的抗产毒和抗生长机制。然而，这些有效的靶向防控机制在黄曲霉毒素生物合成靶向抑制方面仍然没有被清楚的揭示。很显然，这两种机制能够影响细胞进程和黄曲霉毒素生物合成代谢物的产生。但到目前为止，国际上仍未见能够有效和稳定地同步定量黄曲霉毒素生物合成通路化合物的分析方法。开发一个黄曲霉毒素生物合成通路靶向代谢组分析方法将有助于深入理解黄曲霉毒素细胞区室化和黄曲霉毒素转运机制。

发明内容

本发明要解决的技术问题是针对现有技术的不足而提供黄曲霉毒素生物合成通路靶向代谢组分析方法。

本发明为解决上述技术问题，所采用的技术方案为：

黄曲霉毒素生物合成通路靶向代谢组分析方法，其包括如下步骤：进样，经液相色谱-质谱检测，得到包含一级和二级质谱信息的原始数据，对照质谱标准谱库进行定性分析获得已有标谱化合物的定性结果；根据已有标谱化合物的质谱图信息，生成这些化合物的多级质谱碎裂树，同时根据一级质谱质荷比提取样品中其他没有标谱的黄曲霉毒素生物合成路径化合物，根据这些化合物的二级质谱信息生成它们的多级质谱树，然后根据生物合成通路中相临化合物结构相似、质谱行为相似的规律，基于质谱碎裂规律来定性没有标谱化合物，从而实现未知化合物定性分析。

按上述方案，所述定性分析时对于有标谱化合物，依据化合物的高分辨一级质谱信息，根据实际测量值与计算值来计算质量偏差，用高分辨率的一级精确质量数来初步定性，同时结合色谱保留时间和二级质谱信息比对质谱标准谱库进行精准定性；对于无标谱化合物，依据化合物的高分辨一级质谱信息，根据实际测量值与计算值来计算质量偏差，用高分辨率的一级精确质量数来初步定性，同时结合色谱保留时间，将其质谱碎裂树与黄曲霉毒素生物合成通路中临近的目标有标谱化合物的质谱碎裂树进行相似性比较，然后基于质谱碎裂规律进行化合物的准确定性。

按上述方案，所述的黄曲霉毒素生物合成通路靶向代谢组分析方法包括对定性分析得到的化合物进行定量分析。

按上述方案，所述的定量分析为：根据所得黄曲霉毒素通路化合物定性结果，将黄曲霉毒素通路化合物中已有标准品化合物配制成一系列浓度的标准溶液，采用内标法或外标法绘制标准曲线进行定量分析；