[发明专利]杉并根结线虫的PCR检测特异性引物及试剂盒

权利要求书

1.杉并根结线虫的PCR检测特异性引物，所述特异性引物的序列如下：

上游引物MSF：5'-TGGTCGTGTAACGGCTAAC-3'

下游引物MSR：5'-GATTTTCGCCCCTCAAACACC-3'。

2.一种杉并根结线虫的PCR检测试剂盒，其特征在于所述试剂盒中的特异性引物的序列如下：

上游引物MSF：5'-TGGTCGTGTAACGGCTAAC-3'

下游引物MSR：5'-GATTTTCGCCCCTCAAACACC-3'。

3.如权利要求2所述的杉并根结线虫的PCR检测试剂盒，其特征在于所述杉并根结线虫的PCR检测试剂盒的组成如下：

无Mg²⁺的10×PCR缓冲液5.0μL，浓度为25mM的MgCl₂溶液5.0μL，浓度为0.1mM的dNTP溶液4.0μL，浓度5U/μL的Taq酶溶液0.6μL，浓度都为10μM的上游引物MSF溶液和下游引物MSR溶液各3.0μL，待测DNA模板1.0～5.0μL，ddH₂O补齐至50μL。

4.利用权利要求2或3所述的杉并根结线虫的PCR检测试剂盒对杉并根结线虫进行鉴定的方法，其特征在于所述方法为：

提取待测线虫样品的DNA作为PCR模板，利用杉并根结线虫的PCR检测试剂盒中的特异性引物作为扩增引物，进行PCR扩增，对扩增产物进行电泳检测，若电泳结果出现428bp的特异DNA条带，则待测线虫为杉并根结线虫，反之则否。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于所述PCR扩增的条件如下：94℃预变性3min；94℃变性30s，58℃退火30s，72℃延伸30s，共35个循环；最后一个循环结束后，72℃延伸6min。

6.如权利要求4所述的方法，其特征在于所述利用杉并根结线虫的PCR检测试剂盒对杉并根结线虫进行鉴定的方法包括如下步骤：

(1)提取待测线虫样品的DNA作为PCR模板；

(2)利用杉并根结线虫的PCR检测试剂盒中的特异性引物作为扩增引物，进行PCR扩增，PCR扩增的反应体系如下：

无Mg²⁺的10×PCR缓冲液5.0μL，浓度为25mM的MgCl₂溶液5.0μL，浓度为0.1mM的dNTP溶液4.0μL，浓度5U/μL的Taq酶溶液0.6μL，浓度都为10μM的上游引物MSF溶液和下游引物MSR溶液各3.0μL，待测DNA模板1.0～5.0μL，ddH₂O补齐至50μL；

PCR扩增的条件为：94℃预变性3min；94℃变性30s，58℃退火30s，72℃延伸30s，共35个循环；最后一个循环结束后，72℃延伸6min；

(3)PCR扩增产物进行电泳检测：取出PCR扩增产物5μL，用10g/L琼脂糖凝胶电泳检测扩增结果，在428bp处出现扩增条带的为杉并根结线虫，反之则否。