[发明专利]一种人皮肤成纤维细胞提取方法及其培养基

权利要求书

1.一种人皮肤成纤维细胞提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将人的真皮组织剪碎并用含0.25％IV型胶原酶和0.1％胰蛋白酶的混合酶溶液消化至大组织块消失后终止消化；

2)过滤消化后的真皮组织，收集滤液，离心，弃上清，收集沉淀的细胞并接种于培养瓶中，用筛选培养基培养；

3)培养至细胞融合度达到70％后更换部分筛选培养基为扩增培养基，继续培养；

4)培养至细胞融合度达到90％后，传代培养，并更换全部培养基为扩增培养基。

2.如权利要求1所述的人皮肤成纤维细胞提取方法，其特征在于，所述提取方法在步骤1)之前还包括步骤：手术采集人皮肤组织，并去除皮下肌肉及脂肪组织，保留真皮组织。

3.如权利要求1所述的人皮肤成纤维细胞提取方法，其特征在于，步骤1)中消化温度为37℃，消化时间为30-40分钟。

4.如权利要求1所述的人皮肤成纤维细胞提取方法，其特征在于，步骤2)中过滤的目数为200目，离心转速为1600-2000rpm，离心时间为8-12分钟。

5.如权利要求1所述的人皮肤成纤维细胞提取方法，其特征在于，步骤2)中接种细胞的密度为0.8×10⁵-1.2×10⁵个/mL。

6.如权利要求1所述的人皮肤成纤维细胞提取方法，其特征在于，步骤2)中所述筛选培养基的配方为：DMEM高糖培养基作为基础培养基，其中含有体积含量为8-12％的澳洲胎牛血清，以及0.4-0.6ng/mL的EGF和4-6ng/mL的bFGF作为添加因子。

7.如权利要求1所述的人皮肤成纤维细胞提取方法，其特征在于，步骤3)中所述扩增培养基的配方为：DMEM高糖培养基作为基础培养基，其中含有体积含量为8-12％的澳洲胎牛血清。

8.一种用于人皮肤成纤维细胞提取的皮肤成纤维细胞筛选培养基，其特征在于，其配方为：DMEM高糖培养基作为基础培养基，其中含有体积含量为8-12％的澳洲胎牛血清，以及0.4-0.6ng/mL的EGF和4-6ng/mL的bFGF作为添加因子。

9.如权利要求8所述的皮肤成纤维细胞筛选培养基，其特征在于，所述澳洲胎牛血清的体积含量为10％，EGF的含量为0.5ng/mL，bFGF的含量为5ng/mL。

10.一种用于人皮肤成纤维细胞提取的皮肤成纤维细胞扩增培养基，其特征在于，其配方为：DMEM高糖培养基作为基础培养基，其中含有体积含量为8-12％的澳洲胎牛血清。