[发明专利]抗耐药菌活性物质青霉碱醚A及制备和用途

权利要求书

1.一种抗耐药菌活性物质青霉碱醚A，所述的青霉碱醚A的化学结构式为：

2.权利要求1所述抗耐药菌活性物质青霉碱醚A的制备方法，其特征在于，通过以下步骤获得：

(1)灰黄青霉的分离培养

取粗腿厚纹蟹(Pachygrapsus crassipes)在75％的乙醇中浸泡10秒除去表面微生物,然后用无菌水清洗三次后匀浆,离心后取上层液配制成不同浓度的悬浮液，取不同浓度的悬浮液均匀分散到含有固体培养基的培养皿中，在室温条件下培养后，将不同的菌落分别转移到另一含有固体培养基的培养皿中，在室温条件下继续培养，最后将生长良好的单一菌落接种到斜面培养基培养后置4℃冰箱保存备用；固体培养基为马铃薯葡萄糖琼脂，室温条件为：温度22～28℃，培养时间为5～15天；

(2)灰黄青霉的菌种鉴定

上述步骤(1)分离培养所获得的菌株用目前实验室普遍使用的ITS rDNA序列分析方法鉴定其种类，确定为灰黄青霉，分类命名为Penicillium griseofulvum ZZ380，已被中国典型培养物保藏中心-武汉中心保藏，保藏编号:CCTCC M 2018344，保藏日：2018.6.4；保藏地址：中国.武汉.武汉大学；

(3)灰黄青霉发酵菌液的制备

将灰黄青霉的菌种接种到含有菌种培养基的大三角烧瓶中，将含有ZZ380菌种的培养液在室温条件下振荡培养后得到菌种液，最后将菌种液转入含有液体培养基的大三角烧瓶中，经特定温度静置培养后，得到含有活性物质青霉碱醚A的发酵菌液；

(4)青霉碱醚A的提取分离纯化

菌株ZZ380的发酵菌液离心后分成发酵菌丝体和发酵液两部分，菌丝体用甲醇提取得到甲醇提取物，发酵液用乙酸乙酯萃取得到乙酸乙酯萃取物，将甲醇提取物和乙酸乙酯萃取物合并得到总提取物，总提取物先用十八烷基硅烷键合硅胶柱层析分离,分别用40％、60％、80％和100％的甲醇洗脱，得到组分I～IV，组分IV再用制备型高效液相色谱仪分离纯化，得到纯化合物青霉碱醚A；

(5)青霉碱醚A的结构鉴定

青霉碱醚A的结构是根据它的紫外光谱、一维和二维核磁共振谱、高分辨质谱数据以及单晶X-射线衍射等方法相结合而确定。

3.根据权利要求2所述抗耐药菌活性物质青霉碱醚A的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述的菌种培养基和液体培养基均为马铃薯-葡萄糖肉汤液体培养基，所述的用量为250mL；特定温度为28℃，培养时间为30天。

4.根据权利要求2所述抗耐药菌活性物质青霉碱醚A的制备方法，其特征在于，步骤(4)所述柱层析的用量与上柱的样品量比例是30～50g：1.0g；所述的高效液相分离条件是:岛津LC-20AP高效液相色谱仪，富士C₁₈CT-30色谱柱280×30mm，10μm，甲醇和水为流动相体积比91/9，检测波长210nm，流速为15.0mL/min。

5.根据权利要求1所述的抗耐药菌活性物质青霉碱醚A在制备抑制耐甲氧西林金黄色葡萄球菌生长的药物中的应用。