[发明专利]一种检测甲胎蛋白异质体AFP-L3含量的试剂盒/试剂板

说明书

本发明公开了一种检测甲胎蛋白异质体AFP‑L3含量的试剂盒，包括生物素LCA，包被有甲胎蛋白抗体的磁微粒混悬液或包被板，辣根过氧化物酶/吖啶酯标记的甲胎蛋白抗体，辣根过氧化物酶标记/吖啶酯标记的链霉素及校准品。本发明试剂盒操作简单快捷，利用甲胎蛋白抗体磁微粒混悬液或甲胎蛋白抗体包被板对总AFP特异性结合，以及生物素化的LCA对AFP‑L3的强吸附性，形成夹心复合物，通过链霉素和生物素高亲和力放大效应，直接检测AFP‑L3的浓度。较与北京热景公司提供的检测AFP‑L3的试剂盒相比，无需多重繁琐步骤处理血清提取AFP‑L3，避免了提取AFP‑L3的繁琐步骤，节省时了间，检测更加方便快捷，且临床灵敏度、特异性较高，满足了临床检测需求。

技术领域

本发明涉及体外诊断技术，尤其是涉及一种检测甲胎蛋白异质体AFP-L3含量的试剂盒/试剂板。

背景技术

肝癌即肝脏恶性肿瘤，可分为原发性和继发性两大类，是我国高发的、危害极大的恶性肿瘤。原发性肝癌起源于肝脏的上皮或间叶组织；继发性或称转移性肝癌系指全身多个器官起源的恶性肿瘤侵犯至肝脏，一般多见于胃、胆道、胰腺、结直肠、卵巢、子宫、肺、乳腺等器官恶性肿瘤的肝转移；肝癌病情发展迅速，致死亡率较高，所以对肝癌的早期诊断迫在眉睫。

目前肝癌的早期诊断方法为肝癌血清标志物检测：方法①是对血清甲胎蛋白（AFP）测定，该方法对诊断本病有相对的特异性，当免疫法测定持续血清中AFP≥400μg/L，并能排除妊娠、活动性肝病等，即可考虑肝癌的诊断。但是临床上约30%的肝癌患者AFP为阴性，如同时检测AFP异质体，则可使阳性率明显提高。方法②是血液酶学及其他肿瘤标志物测定，检查肝癌患者血清中γ-谷氨酰转肽酶及其同功酶、异常凝血酶原、碱性磷酸酶、乳酸脱氢酶，同功酶可高于正常，但缺乏特异性。

甲胎蛋白AFP是糖蛋白，其蛋白上含有不同糖链，依据不同糖链与小扁豆凝集素（LCA）的亲和力，可将总AFP分为AFP-L1、AFP-L2、AFP-L3，其中：AFP-L1来源于良性肝病细胞（LCA非结合型）；AFP-L2来源于孕妇（LCA弱结合型）；AFP-L3来源于癌变肝细胞（LCA强结合型）。LCA是凝集素的一种，凝集素(Lectin)是指一种从各种植物、无脊椎动物和高等动物中提纯的糖蛋白或结合糖的蛋白，因其能凝集红血球(含血型物质)，故名凝集素。最常用的为植物凝集素，通常以其被提取的植物命名，如刀豆素A(Con convalina，ConA)、麦胚素(Wheat germ agglutinin,WGA)、花生凝集素(Peanut agglutinin，PNA)、大豆凝集素(Soybean agglutinin，SBA)、小扁豆凝集素(Lens cuinaris agglutinin，LCA)等。LCA结合的AFP糖链（AFP-L3）中具有与天门冬酞胺(Asn)连接的N一乙酞基葡萄糖残基,在此残基上结合有一个岩藻糖残基。

目前检测AFP-L3的试剂盒主要由北京热景公司提供，检测时，需要先将样本进行处理以提取甲胎蛋白异质体AFP-L3，而样本的处理过程包括离心、清洗液稀释、离心去保护液、加样、清洗离心、换离心柱洗脱离心等多个步骤，过程比较繁琐、耗时，导致检测方法非常麻烦。

若能利用LCA对AFP-L3的强吸附特点构建检测AFP-L3试剂盒，其临床意义可体现在以下几点：①在原发性肝癌（PLC）的辅助预测、诊断、疗效评估、预后判断及复发检测中均有重要应用价值。②对于低水平AFP人群，AFP-L3可辅助预测、诊断PLC。③有助于区分良恶性肝病的鉴别诊断。④可作为独立标志物监测PLC的预后及复发。若将其用于肝癌的早期诊断，预期可比影像学提早3-28个月发现肝癌，也就能为患者提供更多的治疗机会。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测甲胎蛋白异质体AFP-L3更加快速、方便的试剂盒。

本发明所述的一种检测甲胎蛋白异质体AFP-L3含量的试剂盒，包括生物素LCA，包被有甲胎蛋白抗体的磁微粒混悬液或包被板，辣根过氧化物酶/吖啶酯标记的甲胎蛋白抗体，辣根过氧化物酶标记/吖啶酯标记的链霉素及校准品。